促红细胞生成素（EPO）是分子量为34.4kD的糖蛋白，也是机体重要的造血生长因子。EPO主要来自成人的肾脏，肝、脑和肺细胞亦能产生少量EPO，胎儿EPO则主要由胎肝产生。EPO确切的作用机理尚未完全阐明。实验表明EPO是与EPOR结合并使后者发生同源二聚体化，通过JAK2、STAT5、STAT1、SHC、SHIP、ERK、JNK、P38、PI-3激酶等分子进行细胞内信号传导，从而调节靶细胞的增殖和分化，并使靶产生抗凋亡作用。EPO的生物学作用包括：①促进红系前体细胞增殖、成熟和分化；②促进CD34~+前体细胞分化为巨核细胞细胞、巨核细胞细胞成熟和分化及提高新生血小板的合成和粘附作用；③作为神经营养因子改善中枢神经细胞的存活能力。EPO是应用最早的生物药品之一。1985年EPO的cDNA被成功克隆后，rhEPO被广泛应用于 中文初要 治疗各类贫血，如：治疗肾衰后的贫血、癌性贫血、类风湿性关节炎 患者的贫血、FlV患者的贫血、孕、产妇及早产儿贫血，改善MDS的 贫血状况、促进骨髓移植思者红系细胞的恢复、用于自体输血准备和 术后纠正贫血等；人们正试图将EPO用于提高脑外伤、脑缺血、早老 性痴呆（Alzhe讪r’s Disease）思者脑神经细胞的存活能力以及治疗血小 板功能不良。而EPO在耐力项目的运动员中的滥用及其产生高血压、 血液粘滞、心血管损害等问题己被日益关注。目前国内己有多家生产 EPO的厂家，其EPO定量需进口国外的ELISA检测试剂盒，EPO作 用机理的进一步探讨确也需籍助于EPO单克隆抗体。国内外研制抗人 EPO单克隆抗体己有H十年时间，由于EPO的低免疫原性，鲜有成功 报道。所以抗人EPO单克隆抗体的研制对EPO定量及机理研究有重要 意义，同时也是对低免疫原性抗原单克隆抗体研制的一次探索。 本研究以hEPO为抗原、采用体外诱导源于Balblc ’J’鼠骨髓的抗 原提呈细胞（APC）来加强抗原提呈，继而运用B淋巴细胞杂交瘤技 术将免疫小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合，经ELISA法筛选获 得杂交瘤阳性克隆和有限稀释法对阳性克隆进行亚克隆，共获得3株 持续稳定分泌特异性抗人EPO单克隆抗体杂交瘤，分别命名为IDI、 4A8、7B6，经体外长期传代培养、液氮冻存半年以上复苏良好、稳定 分泌单克隆抗体。 经亚类鉴定＊ 为IgGZb，4A8、7B6为I咖，通过体内法生产单 克隆抗体腹水，IDI腹水经 PoeinG亲和层析分离纯化，用 Western Blot 证实其对hEPO的特异性识别，4A8、7B6则通过优球蛋白沉淀法进行 ．4－ 中文摘要 纯化。 生物学实验表明，3株单克隆抗体能不同程度地抑制EPO对人类多 因子依赖的红白血病细胞株TF上 的增殖效应。Biotin标记的抗体进行 竟争抑制实验，表明该3株单克隆抗体识别相同或相似的抗原位点。 同时，实验提示采用体外诱导源于骨髓的APC加强抗原提呈，可 以提高免疫动物对低免疫原性抗原的反应性。 采用这3株单克隆抗体和抗人EPO的多克隆抗体或研制识别不同 位点的抗人EPO的单克隆抗体，将为研制特异性和灵敏的EPO酶联夹 心检测方法提供物质基础，也有助于研究EPO的生物学特性及其信号 传导。