氟对中枢神经系统CaMKⅡ基因和蛋白表达的影响

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目的:研究氟对于人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)及发育期大鼠海马区钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα亚单位(α-CaMKⅡ)的基因及蛋白表达水平的影响。  方法:1、体外细胞试验:体外培养SH-SY5Y细胞,在培养液中加入不同浓度的氟化钠,使培养液中氟离子的终浓度分别为0.00 mmol/L,005 mmol/L,0.50mmmol/L,2.00 mmol/L及5.00 mmol/L,每组重复实验3次(3瓶/组)。培养48h后使用QRT-PCR检测细胞α-CaMKⅡ的mRNA水平;使用Western blot技术测定α-CaMKⅡ的蛋白水平。  2、动物实验:使12只SD大鼠按雌∶雄=3∶1自然交配,待乳鼠出生后1天(1d,day),乳鼠及其哺乳大鼠一并随机分为对照组、中、高剂量染氟组。幼鼠在出生后14天(P14 postnatal day)处死,每个剂量组8只幼鼠,急性分离幼鼠海马,应用Western blot检测上述部位α-CaMKⅡ的蛋白表达变化。P28天重复试验。  结果:1、体外实验中,随着培养液内氟离子浓度的升高,SH-SY5Y细胞α-CaMKⅡ的mRNA水平及蛋白水平依次降低,并呈现剂量-效应关系(P<0.01)。  2、动物实验中,P14乳鼠海马区α-CaMKⅡ蛋白水平各实验组均低于对照组(P<0.01),但实验组间差异无显著性(P=0.798);P28幼鼠海马区α-CaMKⅡ蛋白水平随着氟离子浓度的增加而依次降低,反应呈剂量-效应关系(P<0.01)。  结论:氟能降低神经细胞及海马α-CaMKⅡ的基因和蛋白表达水平,提示这可能是氟中毒抑制LTP的形成、引起学习记忆损害的机制之一。
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