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为探讨双酚A对小鼠肝脏、脾脏和小肠的毒性作用,本试验选取100只30g左右雌性、昆明小白鼠作为试验动物,采用血液生化检测技术、组织化学染色技术、免疫组织化学方法和图像分析技术等观察了各组小鼠肝脏、脾脏和小肠黏膜的形态结构,并对肝脏中细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2的表达和脾脏中CD4<+>、CD8<+>T细胞的数量进行了定量观察;同时,还观察了肠道的碱性磷酸酶(AKP)活性及杯状细胞的数量和分布的动态变化。结果如下:
1.血液生化指标测定结果表明,双酚A染毒后小鼠血清中四种肝功能酶均发生了一定的变化,其中,高、中剂量组小鼠血清中ALT、AST的含量先升高后降低,2h和4h明显高于对照组(P<0.05),24h降为最小值。双酚A低剂量组各时间点与对照组差异均不显著(P>0.05)。在整个试验过程中,TP、ALB的变化不明显(P>0.05)。
2.组织病理学观察结果显示,随着染毒时间的延长,高剂量试验组小鼠肝脏中出现大量肝细胞变性、坏死,汇管区血管周围炎性细胞浸润。Bcl-2和Bax免疫组化染色结果显示,双酚A高、中剂量组小鼠肝细胞中Bcl-2阳性物质的表达量明显低于对照组(P<0.05或P<0.01),低剂量组在36h和72h与对照组差异显著(P<0.05),其他时刻差异不显著。高、中剂量组小鼠肝细胞中Bax阳性物质的表达量在2~36h明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),低剂量组在2h和24h与对照组差异显著(P<0.05)。
3.对脾脏中CD4<+>和CD8<+>T细胞免疫组织化学观察结果显示,各双酚A试验组小鼠脾脏中CD4<+>和CD8<+>T细胞数量明显高于对照组,CD4/CD8比值明显降低,阳性细胞的量呈明显的双酚A剂量依赖性,表现为高剂量>中剂量>低剂量试验组,且CD8<+>T细胞阳性反应强度较CD4<+>T细胞明显。
4.采用H.E.、PAS和Gomori染色对双酚A对试验鼠小肠结构的影响的观察结果显示,各试验组小鼠肠黏膜均有明显水肿,并伴有黏膜上皮细胞变性、脱落。与对照组相比,不同取材时间,各试验组小鼠的十二指肠绒毛长度明显降低,肠黏膜上皮内杯状细胞(GC)的数量以及肠黏膜中AKP活性也显著低于对照组(P<0.05)。
述结果表明,不同剂量的双酚A对小鼠肝脏、脾脏和小肠有不同程度的损伤,且损伤程度与双酚A的染毒剂量呈正相关。同时,对肝脏中的凋亡相关因子Bcl-2和Bax也有显著的影响,可促进促凋亡因子Bax的表达,而诱发肝细胞凋亡。此外,双酚A可改变CD4<+>/CD8<+>T细胞比值,来影响机体的免疫功能。本试验为深入揭示双酚A对小鼠的毒性作用提供了新的思路。