褐黄血蜱中肠转录组分析和serpin 2表达、鉴定

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蜱是一类具有重要公共卫生意义的寄生虫,但至今尚无环保、安全、高效的控蜱方法。本研究以蛋白质组资料为线索、转录组资料为依据,克隆、表达、分析了褐黄血蜱的serpin 2,不仅可以加深对蜱生物学特性的了解,而且可以为蜱和蜱传疾病的控制提供新的思路,研究结果汇集于后。以半饱血、饱血雌性褐黄血蜱为研究对象,以Illumina技术测定其中肠转录组序列,得至0143,093,114 reads、76,556 unigene; unigene平均长度达到704 bp;登录Nr、Swiss-Prot、 GO、KOG和KEGG数据库搜索各unigene功能,其中被Swiss-Prot数据库功能注释的unigene 26,652个,占34.81%;RPKM算法分析显示,对比半饱血状态,饱血状态下中肠有3940个基因上调,1568个基因下调基因。Contig7475是褐黄血蜱雌成蜱中肠转录组文库中的一个Unigene,功能注释为serpin2编码基因片段,与长角血蜱serpin 2基因比对显示该片段缺少5’端和3’端序列。通过5’-RACE和3’-RACE得到褐黄血蜱serpin 2基因全长(1488 bp);分析表明,该基因开放型阅读框长1197 bp,共编码397个氨基酸,信号肽位置为第1-17 aa;其序列与长角血蜱的相似度最高,为85.14%。将serpin2的ORF插入pET-28a (+),重组质粒转化BL21 (DE3),经诱导高效表达一蛋白,其相对质量为42 kDa, western-blot证明,该蛋白为重组蛋白。体外实验表明,纯化的serpin2融合蛋白可使活化部分凝血酶时间明显延长,也能延长凝血酶时间和凝血酶时间,但效果不显著(未超过3S),由此断定,serpin2融合蛋白的抗凝血作用机制在于内源性凝血系统。
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