目的：粪肠球菌（Enterococcus faecalis, E. faecalis）作为引起根管治疗失败的主要致病菌之一，具有较强的耐药性和生存力，单纯机械预备很难完全清除根管内E. faecalis感染，且其对临床常用根管消毒药物反应不敏感。因此，寻求一种有效对抗根管内E. faecalis感染的新方法或辅助手段已成为满足牙髓治疗需要的必然趋势。光动力疗法（Photodynamic Therapy, PDT）作为具有应用前景的新型抗感染策略之一，已在对抗全身感染性疾病（如皮肤感染及骨科感染）中取得良好进展，故本研究拟探讨其应用于控制根管粪肠球菌感染的可行性。本研究首先通过体外实验观察其对人牙周膜成纤维细胞（Human Periodontal LigamentFibroblasts, hPDLFs）的毒性作用考察其生物安全性，再利用菌落计数法及扫描电镜（Scanning Electron Microscope, SEM）评估该疗法对浮游状态E. faecalis及根管感染模型中细菌生物膜的抗菌性能，旨在探索PDT用于根管消毒的安全性和可行性。同时，本研究还观察比较了两种不同剂型MB介导的PDT，以及不同光照方式介导的PDT的抗菌效应，从而分析影响PDT抗菌疗效的相关因素。实验一两种剂型亚甲基蓝光动力疗法对人牙周膜成纤维细胞的体外毒性研究目的：研究两种剂型MB介导的PDT对体外培养的hPDLFs的毒性作用。方法：将体外培养的hPDLFs分别加入两种剂型MB中（光敏剂终浓度分别为0.1，1.0，10，25，50μmol/L），孵育10min后，选择波长670nm半导体激光器照射5min，输出功率40mW，光照能量为12J。光照结束后继续培养24h，用噻唑蓝（MTT）比色法计算细胞相对增殖率从而反映两种剂型MB的细胞毒性，光镜下观察细胞形态学变化。结果：两种剂型MB介导的PDT对体外培养的hPDLFs的毒性作用未见明显差异（P>0.05）。当MB浓度≤25μmol/L时，细胞毒性为1~2级，光镜下观察细胞未发生明显形态学改变；浓度≥50μmol/L时，细胞毒性为3级，可观察到细胞皱缩、变圆。结论：PDT对hPDLFs的毒性作用受光敏剂浓度影响，适当浓度的两种剂型MB介导的PDT对体外培养的hPDLFs影响轻微。实验二两种剂型亚甲基蓝光动力疗法对粪肠球菌的体外抗菌研究目的：体外研究两种剂型MB介导的PDT对浮游状态E. faecalis的抗菌效应。方法：以浮游状态E. faecalis作为实验对象，将浓度为100μmol/L的两种剂型MB孵育10min后，选择波长670nm半导体激光器照射5min，输出功率为50mW，光照能量为15J。采用菌落计数法检测两种剂型MB介导的PDT对E.faecalis的杀伤作用。结果：水剂型MB和混合剂型MB介导的PDT对E. faecalis的抗菌率分别为99.976%和99.982%，二者相比较，差异无统计学意义（P>0.05）；单独光照组及暗毒性组对E. faecalis的杀伤作用不如PDT组（P <0.05）。其中单独光照组抗菌率为67.5%，暗毒性组抗菌率分别为71.69%（水剂型MB）和73.67%（混合剂型MB）。结论：两种剂型MB介导的PDT对体外培养的E. faecalis具有明显杀伤作用，且只有光源与光敏剂联合使用方能达到最佳效应。实验三不同光照方式介导的光动力疗法对牛牙粪肠球菌根管感染模型的体外抗菌研究目的：体外研究两种不同光照方式介导的PDT对根管内E. faecalis感染的抗菌效应。方法：以水剂型MB为光敏剂，将成功建立根管E. faecalis感染模型的18个牛牙样本随机分为2组每组9个样本，分别采用不同光照方式进行PDT处理即：光导纤维置于根管口照射及光导纤维置于根管内距离根尖约1mm处照射。所有实验样本均接受波长为670nm的半导体激光器照射5min，其输出功率设置为50mW，光照能量15J。于实验前、后分别取样，即刻培养检测根管内E. faecalis数目，通过菌落计数法检测两种光照方式介导的PDT对根管内E.faecalis感染的抗菌率。结果：光导纤维置于根管口照射和根管内照射的抗菌率分别为95.23%和95.89%，二者相比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：在相同光照参数条件下，PDT的抗菌效应不受光导纤维在根管内的位置影响。实验四两种剂型亚甲基蓝光动力疗法对牛牙粪肠球菌根管感染模型的体外抗菌研究目的：体外研究两种剂型MB介导的PDT对根管内E. faecalis感染的抗菌效应。方法：建立牛牙根管E. faecalis感染模型后，随机将45个牛牙样本分为5组每组9个样本，分别采用不同消毒方法即：超声冲洗组（2.5%NaOCl溶液），PDT组（水剂型MB、混合剂型MB），超声冲洗联合PDT组（水剂型MB、混合剂型MB）。5组实验中，除超声冲洗组外其余样本均接受波长为670nm的半导体激光器照射5min，输出功率设置为50mW，光照能量15J。于根管消毒前、后取样，即刻培养检测根管内E. faecalis数目；实验结束后，每组随机选取3个样本SEM观察根管牙本质小管内残存细菌的形态。结果：5组实验中，超声冲洗联合PDT处理抗菌率最高，分别为99.96%（水剂型MB）和99.92%（混合剂型MB），其抗菌作用明显优于单独水剂型MB介导的PDT组（抗菌率95.89%）（P <0.05），但与其他组相比较（单独超声冲洗组抗菌率99.46%，单独混合剂型MB介导的PDT组抗菌率98.3%），差异无统计学意义（P>0.05）。SEM观察发现经不同方法消毒处理后实验组绝大多数细菌均出现明显形态学变化，其中超声冲洗联合PDT处理后细菌形态变化最明显。结论：超声冲洗联合PDT处理作为根管治疗的辅助手段，可有效提高根管消毒效果。