抗副溶血弧菌鸡卵黄免疫球蛋白的研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liubangming98168
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本文以副溶血弧菌为抗原免疫产蛋母鸡,从鸡卵黄中提取免疫球蛋白,建立抗体的效价检测方法,并研究母鸡的免疫应答,以及抗体的分离纯化方法、稳定性和体外抑菌效果。 首先,制备副溶血性弧菌免疫原,将供试母鸡分为两组,设置高、低剂量组免疫两组母鸡,高剂量组抗原浓度为5×10<8>cfu/mL,低剂量组抗原浓度为5×10<7>cfu/mL。结果表明,接受免疫的所有母鸡均产生免疫应答,免疫成功率为100%。用建立的ELISA方法跟踪检测免疫鸡蛋的效价,高、低剂量组最高效价分别为1:57600和1:28800:低剂量组抗体效价可维持250天,高剂量组抗体效价可维持300天以上。 通过对IgY的分离纯化条件研究发现,用水稀释法初步分离卵黄中的可溶性蛋白,稀释倍数为9倍,pH为5.2时分离效果较好;乙醇分级沉淀抗体的较佳条件是抗体溶液:95%乙醇(V:V)为10:3.5;经过DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析和SephadexG-100凝胶层析连续纯化后可得到电泳纯的抗副溶血弧菌:IgY,用SDS-PAGE测得组成该抗体的两个亚基的分子质量分别为65900 Da和26500 Da。 通过对抗副溶血弧菌IgY的稳定性研究发现,卵黄水提液和纯化后IgY在60℃处理时,活性都没有明显变化,当处理温度达到75℃时,抗体的活性随着处理时间的延长而急剧降低。对于纯化后的IgY溶液,65℃处理时对抗体活性的影响很小,处理2h后仍有84%;70℃处理时,抗体活性有一定的下降,处理2h后还有67%。卵黄水提液受温度的影响比纯化后的抗体更为明显,65℃处理2h后还有73%;70℃处理处理2h后只有46%。试验结果表明,卵黄抗体在70℃以上时容易发生热变性。 IgY在pH<3或pH>12时会发生变性,而在pH3~11时活性稳定。 胃蛋白酶和胰蛋白酶对抗副溶血弧菌IgY的活性保持均有不利作用,在pH2时胃蛋白酶对抗副溶血弧菌IgY的活性影响很大,处理1h后活性保留率仅有12%,处理2h后抗体己经完全失活;而在pH4时胃蛋白酶对抗副溶血弧菌IgY的影响相对较小,处理8h后活性保留率约为71%。胰蛋白酶对抗副溶血弧菌IgY的活性影响也比较大,处理8h后活性保留率还有51%。IgY对胆盐有较好的耐受性,处理8h后的活性保留率约为90%。冻融对抗副溶血弧菌IgY的活性影响不大,反复冻融6次后,IgY的活性基本没有变化。冷冻干燥会使抗体损失近20%的活性。抗副溶血弧菌IgY溶液及其冻干粉在-20℃保存5个月后活性没有明显的改变;贮存在25℃以上时,抗体活性将随贮存时间的延长而快速下降;冷冻干燥后抗体,贮存于4℃即可在长时间内保持较高的活性,而抗体溶液贮存于4℃时活性有一定的下降。 体外抑菌试验结果表明,抗副溶血弧菌IgY能抑制副溶血弧菌的生长繁殖,当抗体浓度大于5mg/mL时,可对副溶血弧菌有明显的抑菌作用。
其他文献
通过研究蛋白酶轻度水解对初乳清蛋白质的影响,期望在保持初乳中主要活性成分的前提下,达到降低制品致敏性的目标,主要研究结果如下: 1.建立了以原料牛初乳或牛初乳粉为原料制
水产品、禽肉、果蔬、蛋乳品、生物制剂等,具易腐性,其生产、运输、销售等环节均需适合的低温环境。冷链系统是保证易腐商品品质必要的手段和最佳途径。在整个冷链中,冷藏库是至
本文选取广东省从化市红柿柿叶为原料,测定柿叶中总黄酮含量,探讨柿叶总黄酮的提取和纯化工艺条件,通过紫外吸收光谱等初步鉴定柿叶中的黄酮类化合物,并研究了柿叶提取物的体外抗
央视农业频道《乡约》走进岳阳君山爱情岛(岳阳楼君山岛景区张金香)作为沿江开放城市、湖南的北大门、国家历史文化名城、中国优秀旅游城市,如何在“一带一路”战略背景下顺
本文利用绿色木霉T-YY液体发酵生产水溶性天然黄色素。初步发酵条件试验发现绿色木霉T-YY代谢产生黄色素与发酵培养基中碳源种类、马铃薯用量、通氧量及发酵时间有关。绿色木
儿时有很多童话故事陪伴着我们,直到我们长大依然对这些故事充满着留恋与好奇!白雪公主、睡美人、长发公主等等,所以对于人像创作以童话主题作为首选。这里,我们以长发公主的
本文通过对荣华二采区10
期刊
本文以石硖龙眼为材料,在3~5℃条件下,将贮藏后期龙眼不同状态果肉分为自溶与未自溶两部分,再以整体果实果肉在贮藏过程中的生理变化为参照,通过对凋亡关键酶Caspase-3活性的检测
本研究以菠萝皮渣为原料,通过微生物发酵制备果胶内切酶,并对果胶内切酶进行分离纯化及酶学特性研究,为菠萝皮渣高值化综合利用提供了一条新的途径。 本研究的主要内容和结果
陈俊愉先生作为当今中国园林植物与观赏园艺学界泰斗、一位倍受尊敬的园林教育家,是中国园林植物与观赏园艺学科的开创者和带头人。他是新中国最早一批留学回国支持祖国建设