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重组腺病毒Ad-HNE的构建及其对K562细胞生物学效应的影响目的：利用AdEasy系统构建携人NE基因的腺病毒载体，在慢性粒细胞白血病细胞株K562中过表达NE,观察其对K562细胞增殖与凋亡的影响。方法：以急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60内的RNA为模板，经RT-PCR得到NE的CDS区并克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV,得到pAd-NE,经酶切鉴定和测序正确后，将其转化入pAdEasy-1-BJ5183进行同源重组，得到重组子Ad-NE并转染293A细胞进行包装。待扩增测定滴度后感染K562细胞，荧光显微镜初步观察感染效率；western-blot进一步鉴定NE是否表达上调； CCK-8法测定细胞增殖情况；流式技术测定细胞凋亡和周期变化。结果：酶切鉴定及测序结果表明重组穿梭质粒pAd-NE构建成功；酶切鉴定显示同源重组成功，得到重组子Ad-NE；荧光显微镜表明病毒包装成功；经过五轮扩增后，病毒滴度达到1.64×1012；感染K562细胞后，荧光显微镜观察感染效率达85%以上；western-blot检测到NE表达上调；CCK-8实验显示NE表达上调后K562细胞增殖能力增强；流式细胞术显示S期细胞明显增多并且细胞凋亡减少。结论：成功构建了携NE的腺病毒表达载体。在慢性粒细胞白血病细胞株K562中，NE可以促进白血病细胞的增殖，抑制其凋亡。结果表明NE可能在白血病的发生发展中起促进作用。干扰NE基因表达对U937细胞增殖和凋亡的影响目的：探讨下调高表达NE的U937细胞中的NE后，U937细胞增殖与凋亡的变化。方法：siRNA-NE在脂质体2000的辅助下转染U937细胞，荧光显微镜观察转染效率；western-blot检测NE表达是否下调；流式细胞术检测细胞凋亡； western-blot检测凋亡相关基因Bax,bcl-2表达情况。瑞士染色观察细胞凋亡情况。结果：荧光显微镜观察到siRNA-NE的转染效率达到95%以上；western-blot结果表明NE表达明显下调；流式细胞术结果显示细胞凋亡增加；western-blot结果显示凋亡蛋白Bax表达上调，抑制凋亡蛋白Bcl-2表达下调,瑞士染色观察到细胞出现核质浓缩，胞浆空泡等典型的凋亡形态学改变。结论：通过siRNA-NE成功的下调了U937细胞中NE的表达水平后，U937细胞通过上调Bax,下调Bcl-2促进U937细胞的凋亡，从而探讨了NE作为治疗靶点的潜在可能性。GW311616A对HL-60细胞增殖和凋亡的影响目的：探讨NE抑制剂GW311616A对急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60增殖与凋亡的影响。方法:将一系列不同浓度的GW311616A作用于对数期的HL-60细胞，CCK8法测定细胞增殖抑制作用，以IC50作为后续的实验浓度；比色法测定GW311616A作用于HL-60细胞后NE活性变化；流式技术检测细胞周期和凋亡变化；瑞士染色观察细胞凋亡情况； western-blot检测周期相关蛋白cyclinB1和凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2表达情况。结果：CCK-8结果显示GW311616A作用于HL-60细胞后，细胞增殖被抑制；胞内NE活性降低；流式结果表明细胞周期被阻滞在G0/G1期且凋亡增加；瑞士染色结果显示，细胞染色质聚集，胞浆空泡形成；western-blot结果表明周期蛋白cyclinB1表达降低，凋亡蛋白Bax表达增加，抑制凋亡蛋白bcl-2减少。结论：特异的中性粒细胞弹性蛋白酶胞内抑制剂GW311616A作用于急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60后，胞内NE的活性降低，细胞通过下调cyclinB1，上调Bax，下调bcl-2来抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。