微生物总数,作为食品检测和环境监测的重要指标之一,如何快速、简便和有效地对其进行测定已成为人们的关注点。国标法,是目前国内应用最为广泛的方法,具有简便可靠的优点,但它耗时较长,一般需要2-3天。随着生物细胞DNA组成及结构的解析,利用DNA结合有机分子的荧光染色技术迅速发展,已广泛用于医疗诊断、细胞成像及DNA定量等生物研究领域。三甲川噻唑橙类似物是新合成的一类可通过活细胞膜和死细胞膜的荧光染料,而碘化丙啶(PI)染料只能通过死细胞膜。本论文利用一种新研发出来的荧光探针-氟乙基三甲川噻唑橙(FE-TO-3),来对微生物总数进行快速的测定。FE-TO-3荧光染料,在浓度0.25-3μmol/ml,37℃染色时间1小时,微生物总数103-106个,荧光强度0.2-23,在激发波长590nm,发射波长647nm下,荧光酶标仪检测,荧光强度与微生物总数,双对数成线性关系。PI荧光染料,样本经70%乙醇40℃固定1小时,12000×g,离心10min,弃上清,染料浓度50-70μg/ml,37℃染色时间1小时,微生物总数104-106个,荧光强度0.1-33,在激发波长495nm,发射波长633nm下,荧光酶标仪检测,荧光强度与微生物死菌数,双对数成线性。论文建立的快速荧光检测方法,样本总菌数可通过FE-TO-3染色测得,死菌数可通过PI染色测得,活菌数可通过总菌数与死菌数之差获得。与GB4789.2菌落总数计数对照,样本检测结果表明,这种荧光探针的检测方法具有良好的准确性和重复性,且检测时间短,只需2h。