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目的:筛选H7亚型流感病毒人源单抗,分析编码抗体的基因特点并检测其生物学功能。同时制备H7亚型流感病毒鼠源单抗,建立用于快速检测H7亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法,为H7N9禽流感病毒感染的免疫治疗及快速诊断提供有力科学支撑。方法:采集自然感染H7N9禽流感患者的全血,对外周血记忆性B细胞进行分选、培养和抗体基因的克隆,通过转染表达抗体后对抗体进行纯化,进而对抗体功能进行初步鉴定。采用小鼠杂交瘤技术筛选H7亚型HA特异性单克隆抗体,以此建立双抗体夹心ELISA（DAS-ELSIA）检测H7亚型流感病毒,并对其灵敏度和特异性进行了评估和鉴定。结果:对9个培养孔进行基因克隆和测序,从1#样本中获得24种VH胚系基因和14种Vκ胚系基因;从3#样本中获得17种VH胚系基因和12种Vκ胚系基因。其中1#样本重链基因以IGHV4-39,IGHV1-69,IGHV4-59和IGHV3-13为主,轻链基因以IGKV1-39为主;3#样本重链基因以IGHV3-9,IGHV3-7,IGHV1-69和IGHV1-2为主,而轻链基因主要以IGKV1-5为主。获得5株全人源单克隆抗体,其中抗体克隆56B11-2/4具有神经氨酸酶抑制活性,其IC50约为52.46μg/ml;抗体克隆10F10-13/13为广谱结合型抗体,对N9蛋白和多种亚型HA蛋白均有很强的ELISA结合活性。获得12株H7特异性鼠源单克隆抗体,其中5株具有血凝抑制活性。根据HI活性选取两株单抗2B6和5E9,建立了DAS-ELISA法用于检测H7抗原。结果显示建立的DAS-ELISA可特异性检测H7亚型流感病毒,而不与其他亚型病毒产生交叉反应。用H7亚型流感病毒和重组H7蛋白对DAS-ELISA的灵敏度进行了检测,重组病毒A/Guangdong/17SF003/2016（H7N9）最低检测限为0.5HAU/50μl,A/Netherlands/219/2003（H7N7）和A/Anhui/1/2013（H7N9）最低检测限为2HAU/50μl;重组H7蛋白可检测到的最低水平为10ng/ml,并呈量-效反应关系。结论:（1）分别获得1株具有神经氨酸酶抑制活性和广谱流感结合活性人源单克隆抗体。（2）利用两株鼠源H7亚型特异性单抗建立DAS-ELISA方法,对H7抗原的检测表现出高灵敏性和强特异性,可用于病毒的快速检测及疫苗HA含量测定。