目的：肿瘤的发生是一个复杂的过程，其治疗方法目前也是通过抑制肿瘤增殖率来达到治疗肿瘤的目的。细胞凋亡理论的提出及在近十年内该领域突飞猛进的进展，无疑提供了一个全新的角度去考察肿瘤的形成及其治疗策略。越来越多的资料表明，细胞凋亡失衡是肿瘤形成及发展的重要原因，诱导肿瘤细胞凋亡是治疗肿瘤的一条崭新并且有效的途径。体内外实验均证实，抗肿瘤药物正是通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥其抗肿瘤活性的。深入研究肿瘤细胞凋亡的分子机制，凋亡相关基因表达调控等课题将为开发新型抗癌药以直接促进肿瘤细胞凋亡的凋亡疗法奠定坚实的理论和实验基础。基于上述认识，本研究使用顺铂作用于体外培养的国内自行建系的人卵巢癌细胞系HO-8910，以探讨顺铂是否通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥其抗肿瘤活性，以及在药物作用过程中凋亡相关蛋白P53的表达情况，为新型抗癌药提供筛选模式，并且为基因治疗癌症提供理论和实验依据。 方法：应用不同浓度顺铂处理HO-8910细胞，于作用的不同时间收集细胞，分别做如下观察：倒置显微镜观察活细胞、Gimsa染色观察细胞形态改变并计数凋亡率、琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解情况、SP免疫组化染色观察凋亡过程中P53蛋白的表达情况。部分涂片还使用 中文摘要了 TUNEL染色计数凋亡细胞，并与 G imsa染色计数的凋亡细胞数作比较。 结果： l、顺铂诱导过程中凋亡细胞形态学观察 门）9．gyg／ml］’匝铂作用 25h后，将培养瓶置倒置显微镜下，原附壁生长的细胞失去彼此连接，收缩变圆，细胞轮廊更加清晰，细胞附壁能力减弱，易从培养瓶壁上脱落下来。 u）细胞涂片Gimsa染色后，高倍镜下见到细胞体积缩小、核固缩、凋亡小体形成。 2、细胞DNA电泳情况 常规培养的细胞抽提DNA电泳后在加样孔附近有一清晰的条带，而经过 9．gpg／ml作用 25h后抽提细胞 DNA进行电泳则呈现梯状电泳模式。说明顺铂作用后激活了细胞的核酸内切酶，降解 DNA形成了 180上 整数倍的核昔酸片段。 3、顺铂诱导过程中凋亡细胞计数情况 凋亡细胞计数结果显示，同一浓度下，随着顺铂与细胞孵育时间的延长，凋亡细胞计数明显升高厌＜0刀5h 孵育相同时间，高浓度顺铂组比低浓度顺铂组凋亡细胞计数升高瞩刃刀5卜表明I’匝铂诱导＊O七引0细胞凋亡呈药物浓度依赖性和药物作用时间依赖性。在 9．gPg／ml作用 30h后，细胞片状坏死增多，无法区分凋亡细胞。 4、顺铂诱导过程中P53蛋白的表达情况 同一药物浓度下，随着观察时间的延长，P53蛋白表达阳性细胞数逐渐升高O叼刀5卜 药物作用相同时间，高 2 中文摘要 浓度顺铂组P53蛋白表达阳性细胞数比低浓度顺铂组明 显增多o＜o．05＞表明）顺铂诱导人卵巢癌细胞系＊＊七91O 细胞凋亡为p53依赖性的。 5、凋亡细胞数与P53蛋白表达阳性细胞数之间的关 系 3＊卜g／ml、6＊卜g／ml、9．gpg／ffil顺铂与HO－8910绍胞 作用不同时间，凋亡细胞数与P53蛋白表达阳性细胞数呈 正相关o＜0刀5）。 6、两种凋亡计数方法的比较 TU’NEL染色计数的凋亡细胞个数明显高于Gimsa染 色，说明’fUNEL法要敏感碍多。但我们认为，对于研究 药物诱导肿瘤细胞凋亡过程中凋亡细胞数在一定时间内 的动态变化过程，用简单的Gimsa染色以观察细胞核的变 化来计数凋亡细胞也能反映药物作用的时间依赖性和浓 度依赖性。 结论：顺铂能够诱导人卵巢癌细胞系 HO七9 0细 胞凋亡，即诱导肿瘤细胞凋亡是顺铂发挥抗肿瘤作用的机 制。）I＠铂诱导人卵巢癌细胞系HO七9 0细胞凋亡为p53 依赖性的，这就为基因治疗癌症提供了实验依据。对于植 物药资源丰富的中国来说，本研究同时提供了一种筛选化 疗药物的模式，若结合本文尚未涉及的有关凋亡信号转导 通路研究方法、其他现代分子生物学手段及生化技术研究 凋亡的模式，将有助于开发出新的抗癌中药制剂，这必将 在我国产生非常深远的意义和广泛的应用价值。