【摘 要】
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目的探究金线莲苷（Kinesenoside,KD）对酒精联合四氯化碳所致的小鼠慢性肾损伤的保护作用及其可能的保护机制。方法雄性C57BL/6J小鼠25只,随机分为对照组（n=5）、模型组（n=5）、酒精组（n=5）、四氯化碳组（n=5）、金线莲苷（KD）组（n=5）。模型组、KD组和酒精组第一周开始给予酒精液体饲料,一周内酒精浓度由1%逐渐增加至4%后维持,对照组和四氯化碳组一直给予对照液体饲料。
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目的探究金线莲苷（Kinesenoside,KD）对酒精联合四氯化碳所致的小鼠慢性肾损伤的保护作用及其可能的保护机制。方法雄性C57BL/6J小鼠25只,随机分为对照组（n=5）、模型组（n=5）、酒精组（n=5）、四氯化碳组（n=5）、金线莲苷（KD）组（n=5）。模型组、KD组和酒精组第一周开始给予酒精液体饲料,一周内酒精浓度由1%逐渐增加至4%后维持,对照组和四氯化碳组一直给予对照液体饲料。第五周开始模型组、KD组和四氯化碳组腹腔注射含5%四氯化碳的橄榄油（2 m L/kg）,对照组和酒精组注射相同剂量的橄榄油,每周两次。KD组在模型组的处理基础上从第一周开始每天给予KD 20 mg/kg灌胃,其余组灌水。第九周后麻醉取材。对照组、模型组、酒精组和四氯化碳组:苏木素-伊红染色（HE）观察肾脏病理改变、免疫组化检测肾小管损伤标志物KIM-1以及氧化应激相关指标CYP2E1的表达情况。对照组、模型组和KD组:HE染色观察肾脏病理改变;免疫组化检测KIM-1;Masson染色观察肾脏组织纤维化改变;蛋白免疫印迹试验（WB）检测纤维化指标α-SMA;免疫组化检测纤维化指标TGF-β1;免疫组化检测与氧化应激相关的指标4-HNE、CYP2E1、Nox4;酶联免疫吸附实验（ELISA）检测炎症指标TNF-α和IL-6;Tunel染色观察肾脏组织细胞凋亡;蛋白组学实验分析KD的肾保护作用可能存在的机制,选择与肾纤维化相关的经典通路运用荧光定量PCR和免疫组化对通路相关分子进行检测。结果1.与酒精组和四氯化碳组相比,模型组酒精联合四氯化碳能够诱导更显著的肾脏病理改变和更显著的KIM-1、CYP2E1表达;2.KD可以减轻酒精联合四氯化碳诱导的肾组织病理改变并减少KIM-1的表达;3.Masson染色显示KD可以减轻酒精联合四氯化碳诱导的肾组织纤维化,且KD可以减少酒精联合四氯化碳诱导的肾组织中α-SMA、TGF-β1表达增加;4.KD可以减少酒精联合四氯化碳诱导的肾组织中4-HNE、CYP2E1和Nox4表达增加;5.KD可以减少酒精联合四氯化碳诱导的TNF-α、IL-6水平显著增高,Tunel染色显示KD可以减少酒精联合四氯化碳诱导的细胞凋亡;6.KD可以抑制酒精联合四氯化碳诱导的肾组织Smad3和Smad4表达上调。结论1.金线莲苷对慢性酒精联合四氯化碳诱导的肾损伤能够起到较好的保护作用,具有一定的抗炎抗氧化以及抗纤维化作用;2.金线莲苷对慢性酒精联合四氯化碳诱导的肾损伤起保护作用可能是通过作用于TGF-β1/Smad信号通路。
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