Nrf2和HO-1在肾癌组织中的表达及临床意义

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目的:肾癌是泌尿系肿瘤中常见的肿瘤,70%-80%为透明细胞癌,近年发病有增加趋势。寻找肾癌的新靶点对于肾癌的早期发现及预后并制定治疗方案有着非常重要的意义。在肿瘤形成和细胞增殖过程中,氧化应激及炎症反应与之密切相关,已成为国内外学者的研究热点,与氧化应激相关途径的有关基因有可能成为潜在的药物治疗肿瘤的作用靶点。目前研究发现很多药物是通过调节Nrf2/HO-1信号通路来发挥抗氧化及抗炎作用的。为探讨Nrf2和HO-1与肾癌发生、发展的关系,本实验通过免疫组化SABC和RT-PCR法检测Nrf2和HO-1在肾癌和癌旁正常组织中的表达情况,探讨Nrf2和HO-1在肾癌发生、发展中的作用。方法:选取河北医科大学第二医院外科手术切除的肾癌组织标本51例。选其中23例患者中的癌旁组织(经病理证实为正常肾组织)为对照组。所有病例术前均未进行过放疗和(或)化疗。所有标本分为两份,一份经4%甲醛溶液固定,石蜡块包埋,另一份保存于液氮之中。免疫组织化学方法检测:应用免疫组化技术,从蛋白水平检测石蜡包埋组织中Nrf2和HO-1的表达,其中肾癌组织标本51例,正常肾组织标本23例。采用双评分半定量法来进行评分,综合统计染色阳性率及染色强度,运用SPSS17.0统计软件处理数据,比较肾癌组织和正常肾组织中Nrf2及HO-1的阳性表达率之间的差异。采用χ2检验,把具有统计学意义显著性差异的临界值定为P<0.05。Nrf2与HO-1关系采用Pearson相关分析。RT-PCR方法检测:根据Trizol试剂盒说明提取冰冻组织中的总RNA,加入RT反应体系管,进行逆转录反应合成cDNA,设立β-actin基因片段为Nrf2和HO-1基因表达的内参照,在RT-PCR仪上进行扩增,取每个标本的扩增产物行琼脂糖凝胶电泳,以DNA Marker(DL2000)作为标准片段标记,电泳后用紫外透射仪观察,应用Quantity One凝胶图象分析软件对目的电泳条带进行分析,以β-actin电泳条带作为参照,结果以两者吸光度的比值表示。两组间吸光度比值采用t检验进行统计分析。P<0.05认为差异有统计学意义。结果:1免疫组织化学染色示:Nrf2主要表达于肿瘤细胞的细胞浆中,在肾癌组织中的阳性表达率为82.4%,在癌旁正常组织中表达的阳性率为34.8%,两者差异有统计学意义(P=0.00,P<0.05)。HO-1主要位于肿瘤细胞的胞浆中,其在肾癌组织中的阳性表达率为76.5%,在癌旁正常组织中的阳性表达率为39.1%,二者阳性表达率差异有统计学意义(P=0.02,P<0.05)。Nrf2和HO-1蛋白的表达呈正相关(r=0.515P<0.05)。2RT-PCR结果显示:Nrf2在肾癌和癌旁正常组织的表达量分别为0.747±0.101和0.374±0.071,二者差异有统计学意义(P<0.05)。HO-1在肾癌和癌旁正常组织的表达量分别为0.853±0.078和0.410±0.085,二者差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1Nrf2和HO-1蛋白在肾癌组织中的表达高于癌旁正常组织中的表达。2Nrf2、HO-1蛋白在肾癌组织中的表达呈正相关。3Nrf2、HO-1蛋白可能参与了肾癌的发生、发展,并在演变过程中起到了重要作用。
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