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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是猪的一种免疫抑制性疾病,该病的主要特征是感染仔猪的呼吸困难,机体消瘦,生长缓慢,怀孕母猪表现为流产等繁殖障碍症状。该病于20世纪90年代分别出现在欧洲和美国,随后蔓延至全球,并成为持续影响全球养猪业最严重的疫病之一。PRRS病原为PRRS病毒(PRRSV),该病毒是属于动脉炎病毒科的有囊膜的单股正链RNA病毒。2006年给我国养猪业带来严重危害的“猪高热病”经研究证实其病原为高致病性PRRSV(HP-PRRSV)。本实验室前期研究发现HP-PRRSV(HuN4毒株)感染可造成断奶仔猪胸腺发生严重萎缩,进一步的实验证实胸腺的萎缩与胸腺内细胞的凋亡有关。本实验的目的在于进一步对胸腺内的凋亡细胞进行鉴定,并对感染猪萎缩胸腺内凋亡相关因子mRNA表达水平进行检测。为阐明HP-PRRSV感染仔猪胸腺内凋亡细胞、感染细胞的类型及感染细胞与凋亡细胞的关系,本实验取HP-PRRSV感染仔猪及对照仔猪的新鲜胸腺,制作冰冻切片,用于免疫荧光染色,并通过激光共聚焦观察,从而对损伤胸腺内的HP-PRRSV感染与凋亡进行鉴定,结果发现,凋亡细胞并未感染HP-PRRSV,同时确定胸腺中凋亡细胞为CD3+细胞;感染细胞为CD14+细胞。为明确HP-PRRSV感染仔猪胸腺内凋亡相关因子的变化,本实验通过建立检测凋亡相关因子TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、Caspase-8和Caspase-3的mRNA的表达水平的SYBRGreenⅠ荧光定量检测方法,并对HP-PRRSV感染仔猪及对照仔猪胸腺内TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、Caspase-8和Caspase-3的mRNA的表达水平进行检测。实验结果表明:与同日龄对照仔猪相比,HP-PRRSV感染仔猪胸腺内与外源性凋亡通路有关的凋亡相关因子如TNF-α、TNFR1、Caspase-8和Caspase-3的mRNA表达水平显著升高(p<0.05),表明HP-PRRSV诱导的胸腺细胞凋亡主要是通过外源性通路介导的。