HP-PRRSV感染仔猪胸腺细胞凋亡的鉴定及凋亡相关因子mRNA表达水平的检测

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:parisjiang
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是猪的一种免疫抑制性疾病,该病的主要特征是感染仔猪的呼吸困难,机体消瘦,生长缓慢,怀孕母猪表现为流产等繁殖障碍症状。该病于20世纪90年代分别出现在欧洲和美国,随后蔓延至全球,并成为持续影响全球养猪业最严重的疫病之一。PRRS病原为PRRS病毒(PRRSV),该病毒是属于动脉炎病毒科的有囊膜的单股正链RNA病毒。2006年给我国养猪业带来严重危害的“猪高热病”经研究证实其病原为高致病性PRRSV(HP-PRRSV)。本实验室前期研究发现HP-PRRSV(HuN4毒株)感染可造成断奶仔猪胸腺发生严重萎缩,进一步的实验证实胸腺的萎缩与胸腺内细胞的凋亡有关。本实验的目的在于进一步对胸腺内的凋亡细胞进行鉴定,并对感染猪萎缩胸腺内凋亡相关因子mRNA表达水平进行检测。为阐明HP-PRRSV感染仔猪胸腺内凋亡细胞、感染细胞的类型及感染细胞与凋亡细胞的关系,本实验取HP-PRRSV感染仔猪及对照仔猪的新鲜胸腺,制作冰冻切片,用于免疫荧光染色,并通过激光共聚焦观察,从而对损伤胸腺内的HP-PRRSV感染与凋亡进行鉴定,结果发现,凋亡细胞并未感染HP-PRRSV,同时确定胸腺中凋亡细胞为CD3+细胞;感染细胞为CD14+细胞。为明确HP-PRRSV感染仔猪胸腺内凋亡相关因子的变化,本实验通过建立检测凋亡相关因子TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、Caspase-8和Caspase-3的mRNA的表达水平的SYBRGreenⅠ荧光定量检测方法,并对HP-PRRSV感染仔猪及对照仔猪胸腺内TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、Caspase-8和Caspase-3的mRNA的表达水平进行检测。实验结果表明:与同日龄对照仔猪相比,HP-PRRSV感染仔猪胸腺内与外源性凋亡通路有关的凋亡相关因子如TNF-α、TNFR1、Caspase-8和Caspase-3的mRNA表达水平显著升高(p<0.05),表明HP-PRRSV诱导的胸腺细胞凋亡主要是通过外源性通路介导的。
其他文献
猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2,PCV2)可导致猪免疫功能损伤,其引起的猪圆环病毒相关疾病(PCV2-associated diseases,PCVAD)给世界养猪业造成了重大经济损失。从发现PCV2
腹腔镜外科手术相对传统开腹手术而言,是一种创伤小、恢复快、术后疼痛轻和低感染率的手术。在国外,腹腔镜技术已经广泛运用到兽医临床动物的诊断和手术、畜牧生产以及胚胎移
鱼类的免疫系统在抵御病原入侵及感染后疾病的恢复上起到了关键作用。其中,IgM是鱼类特异性免疫应答中最主要的介质。目前,血清抗体效价的高低已经成为反映水生动物免疫水平
鸡球虫病(Coccidiosis)是由数种艾美耳球虫在鸡肠道黏膜细胞内寄生引起的一种寄生性原虫病,在集约化养殖场中,球虫病的发病率最高,严重危害养鸡业的发展,其中尤以柔嫩艾美耳
本文根据GenBank中巴氏杆菌外膜蛋白H(OmpH)基因核苷酸序列(登录号:HM582882)分别设计了含信号肽和去信号肽两对特异性引物,通过PCR方法扩增青海省牦牛源多杀性巴氏杆菌((Pasteure
鸡传染性支气管炎是由鸡传染性支气管炎病毒引起的鸡的一种急性、高度接触性的传染病。由于病毒血清型和基因型的多样性导致了疫苗使用的局限性,对于养鸡生产具有严重的危害性
合欢皮(Cortex Albizziae)为豆科植物合欢(Albizzia julibrissin Durazz)的干燥茎皮。其味甘,性平。有安神、活血、消痈的功能。在传统医学中用于失眠、肺脓疡、痈肿、折伤疼
破骨细胞(osteoclast,OC)是一种终末分化的多核巨细胞,来源于造血干细胞,在巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)及核因子κB受体活化因子配体