普鲁士蓝纳米颗粒的制备及用于类风湿性关节炎抗CCP抗体检测的研究

来源 :东南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yluylu2k
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
随着材料化学等科学的持续发展,新材料的开发和性能提高成为研究热点。近年研究发现,磁性Fe3O4纳米颗粒具有模拟过氧化物酶新功能,但其催化能力无法与天然酶辣根过氧化物酶(HRP)相媲美,科学家希望寻找新的途径提高模拟酶的催化能力,将鲁士蓝纳米薄膜或纳米颗粒是迄今发现的对于双氧水电子转移来说最有优势的低电位系统,因此本研究利用普鲁士蓝纳米颗粒构造模拟酶催化系统,大大提高了其与底物的亲和能力及催化能力,达到比HRP更优的水平,利用这一体系,提高生物检测的灵敏度。  类风湿性关节炎是一种常见的自身免疫性疾病也是最多发的慢性炎症性关节疾病,晚期难以治疗,早期检测变得尤为重要,但目前仅有欧美少数几家公司能生产该疾病的早期诊断试剂盒,而且价格偏高,本研究利用普鲁士蓝纳米颗粒构造的模拟酶催化体系开发替代产品,旨在降低生产成本,简化制造工序,研究内容主要包括:  (1).在60℃水浴,柠檬酸保护的条件下,将K4Fe(CN)6溶液逐滴滴入不断搅拌的FeCl3溶液中,制备出稳定的普鲁士蓝纳米颗粒,并研究了各种反应参数对于颗粒形貌的影响。用UV-vis,FTIR,TEM,DLS等进行表征。UV-vis结果表明制备得到普鲁士蓝;使用FTIR进一步分析,表明羧酸根以螯合方式与普鲁士蓝颗粒表面Fe离子结合;通过TEM观察,发现粒子为正方体,平均边长37nm,有一定的结晶度;DLS测得粒子水动力尺寸为80nm,在水溶液中分散良好。米氏动力学常数的测定,证明其与底物的亲和能力大于HRP,并且具有比HRP更高的催化常数Kcat值,可替代其发挥催化作用。  (2).利用静电吸附将金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)与普鲁士蓝纳米颗粒(PBNPs)偶联,制备为能够进行多种疾病检测的通用型探针(Nano-probe)。然后利用DLS测量探针制备前后粒子水动力尺寸的变化,发现与SPA偶联后,水动力尺寸由80nm增加至155nm,加入BSA作为保护剂时,达到229nm。磷钨酸染色后,通过TEM观察到普鲁士蓝纳米颗粒与SPA紧密结合,形成探针。将得到的探针在SDS-PAGE凝胶中进行电泳实验,探索普鲁士蓝与SPA制备探针时的合适用量比例为1:0.3。接着通过ELISA实验优化探针制备时间,发现反应5分钟即显示出很好的ELISA检测效果,因此可以发展出一种使用前快速制备的通用型探针。最后研究了该探针的稳定性以及保存方法。  (3).为了将探针应用于早期类风湿性关节炎血清学检测,我们建立了兔子血清检测系统,通过矩阵实验优化探针稀释比例,通过酶标仪优化显色剂的配比。探针在其中显示了很高的灵敏度和特异性,并得到ELISA检测标准曲线。在应用于人类风湿性外关节炎检测中时,由于该疾病的血清国际上并无标准品,固将兔血清换成类风湿性关节炎检测金标准--欧蒙试剂盒中的阳性标准品进行研究,发现探针显示了较高的灵敏度,线性相关度为0.999,能够达到代替天然HRP检测类风湿性关节炎的诊断目的。
其他文献
本文首先介绍了与水力机械CFD解析有关的若干理论问题。着重比较了各种湍流模式的优缺点及在水力机械CFD解析中的适用性。其次,针对水轮发电机组长时间工作在偏工况的特点,本文
2012年中国的semantic web技术应用得到了爆发性的增长,semantic web技术带来的便捷效用和语义搜索引擎的自然语言解析检索能力让我们对互联网技术有了全新的认识。近两年来,随着我国医疗卫生行业信息化工作由局部信息化建设向区域信息化建设转变,semantic web技术也逐渐被应用到医疗信息行业中来,在实现医疗卫生数据的自然语言检索功能方面做出了一些尝试,同时配合ontology技
近年来,大、中型水电站水轮机组事故不断,水轮机在线故障诊断显得越来越重要,目前国内有个别水电厂实现了对水轮机组特征参量的在线监测和一定程度上的故障诊断分析,在机组安全运
自2019年初起,网络上关于“996工作制”的讨论甚嚣尘上.本文将以“996”为代表的违规工休制度切入,从宪法视角就劳动者休息权以及其作为公民人权应享有之保障等方面进行探讨
经过长期的意见征集与多方讨论,刑事诉讼法与监察法的有机衔接这一修正举措已正式生效,其所蕴含的内在价值与积极意义已逐渐深入社会并得到广大公民的认可.但倘若深入分析会
本文首先考察了变频调速技术和先进控制技术的发展情况和应用概况,对主要的变频调速理论和先进控制技术及其应用作了介绍,通过结合大庆炼油厂二套常减压装置的具体工况
目前生物酶已经广泛商品化,在临床诊断、生物分析等领域都有重要的应用,但由于生物酶一般都具有成本高,保存条件苛刻,容易失活等缺点,应用纳米技术开发稳定便宜的模拟酶逐渐成为了
伴随当前建筑世界的稳定发展,建筑工程的数量不断增多,促进了我国经济迅猛发展.然而,在建筑工程实际建设的过程中,经常会出现“黑白合同”的现象,其产生的根源不仅会受市场影
随着新法的实施,高压触电案件中责任主体的认定由“产权人”定义为“经营者”,且电力设施的所有权、管控权、维护权分离的情形普遍存在,而法律对“经营者”的具体范围并未明
近年来,随着我国供给侧改革的逐步推进,加之激烈的市场竞争影响,部分企业展现出了颓败之势,资金链紧张,对商业银行贷款业务的需求量增加,同时信用违约风险亦是同步增加,导致