论文部分内容阅读
卵巢癌是妇科常见肿瘤,其死亡率居妇科肿瘤之首。卵巢癌临床治疗采取以手术为主,化疗为辅的综合治疗。但原发性或获得性顺铂耐药是卵巢癌患者生存率提高的主要障碍之一。
P型三磷酸腺苷酶(ATP7B)是一种铜转运ATP酶。研究发现ATP7B在卵巢癌SKOV3ipl中高表达,并且ATP7B基因与顺铂耐药有关。反义寡核苷酸技术利用碱基互补配对原理使反义核酸与靶mRNA结合,形成RNA.DNA复合物,激活RNaseH,降解mRNA,以达到抑制靶基因表达的目的。本研究旨在探讨ATP7B反义寡核苷酸对卵巢癌SKOV3ipl细胞顺铂敏感性的影响。
本课题共分二部分:1.针对ATP7B基因反义寡核苷酸对人卵巢癌SKOV3ipl细胞株ATP7B表达的影响;2.ATP7B基因反义寡核苷酸对人卵巢癌SKOV3ipl细胞顺铂敏感性的影响。
第一部分针对ATP7B基因反义寡核苷酸对人卵巢癌SKOV3ipl细胞株ATP7B表达的影响
目的探讨针对ATP7B基因的反义寡核苷酸对人卵巢癌SKOV3ipl细胞株ATP7B表达的影响。
方法人工合成包含ATP7BmRNA翻译起始位点的反义寡核苷酸片段及正义寡核苷酸片段作为对照。用脂质体lipofectamine-2000(LF)将反义寡核苷酸片段及正义寡核苷酸片段转染卵巢癌SKOV3ipl细胞,用RT-PCR法,流式细胞测定法,Westemb10t检测SKOV3ipl细胞转染后,ATP7B基因mRNA、蛋白表达的变化。
结果SKOV3ipl细胞以及转染反义寡核苷酸片段后ATP7B与β-actinmRNA的光密度比值分别为0.831±0.06和0.203±0.07(P<0.01)。流式细胞法检测细胞内ATP7B蛋白的荧光强度由转染前的79.42±4.04下降到50.87±5.47(P0.05)。
结论ATP7B基因反义寡核苷酸片段能显著抑制卵巢癌S1.00V3ipl细胞ATP7BmRNA和蛋白表达。