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第一部分腺病毒载体介导shRNA抑制survivin对PC-3细胞的影响目的:运用RNAi技术抑制前列腺癌PC-3细胞中survivin的表达,检测survivin抑制对PC-3细胞的影响。方法:构建负载survivin短发夹RNA (shRNA)的重组腺病毒(pGSadeno-sur shRNA),体外转染PC-3细胞。MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)检测凋亡率,RT-PCR和western blot分别检测survivin mRNA及蛋白表达。结果:负载survivin shRNA重组腺病毒构建成功;实验组与对照组相比在不同的时间点survivin基因的表达均受到不同程度的抑制,表现为细胞增殖活性下降,凋亡增加,survivin mRNA及其蛋白表达降低。至转染96h后survivin基因抑制最明显, survivin mRNA及其蛋白的表达强度分别降低了(72.23±1.11)%和(71.75±2.64)%,细胞凋亡率达到(14.43±0.57)%,与阴性对照组及空白对照组相比差异有显著统计学意义(P﹤0.01)。结论:腺病毒载体介导的survivin shRNA可有效地抑制PC-3细胞中survivin的表达,RNAi结合腺病毒载体抑制survivin表达有望成为雄激素非依赖前列腺癌的基因治疗方法之一。第二部分survivin对PC-3细胞microRNA表达的影响目的:运用microRNA芯片检测survivin抑制后前列腺癌PC-3细胞中microRNAs表达谱的变化,并预测survivin与相关miRNAs之间的关系。方法:利用负载survivin短发夹RNA (shRNA)重组腺病毒(pGSadeno-sur shRNA),体外转染PC-3细胞96h后,收集细胞提取RNA,microRNA芯片检测miRNAs表达谱变化。结果:共有650个miRNAs表达信号在雄激素非依赖前列腺癌PC-3细胞中可以被检测到,有9个miRNAs的表达信号水平高于1000;实验组与空白对照组相比有75个miRNAs表达具有统计学差异(P<0.01),42个表达上调、33个表达下调;阴性对照组与实验组相比有27个miRNAs表达具有统计学差异(P<0.01),其中22个表达上调、5个表达下调;实验组与空白对照组及阴性对照组相比均表达上调的miRNAs有15个,表达下调的miRNA有1个。结论:抑制PC-3细胞中survivin的表达对miRNAs表达谱的变化有明显影响,为明确相关miRNAs在PC-3细胞中的作用提供了新线索。