版纳小耳猪骨形成蛋白的提取及其骨诱导活性的初步研究

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目的 从版纳近交小耳猪中提取骨形成蛋白(Banna small-ear pigs Bone Morphogenetic Protein,sepBMP),观察其成骨活性并与普通猪骨形成蛋白(Common pigs BMP,cpBMP)的成骨活性作比较。方法 参照Urist方法从版纳小耳猪骨以及普通猪骨中提取骨形成蛋白,以SDS-PAGE凝胶电泳测定sepBMP的相对分子量。选用72只健康雄性BALB/C小鼠,随机分为4组,每组18只,第1组于每只小鼠股部肌间隙内植入2mg sepBMP,第2组植入5mg sepBMP,第3组植入2mg cpBMP,第4组植入5mg cpBMP,分别于术后第7天、第14天和第28天取材,通过拍摄股部X线片、光镜下病理组织学观察以及用酶动力学方法测定组织中碱性磷酸酶(ALP)活性,观察sepBMP诱导成骨活性,并比较其与cpBMP的成骨诱导活性。结果 sepBMP是一含14、22、27、36、48、66kD六种分子成分的蛋白多肽,所有BMP植入组放射学观察均未见明显高密度影形成。组织学观察BMP植入第7天可见大量间充质细胞分化并向软骨细胞转化,第14天有大量软骨形成,第28天见成熟板层骨并有骨髓形成。ALP活性测定结果显示5mgBMP植入组ALP活性明显高于2mgBMP植入组,但同等剂量的sepBMP和cpBMP植入组的ALP活性无差异。结论该法提取的版纳近交小耳猪BMP具有较好的成骨诱导活性,且sepBMp的成骨能力与植入剂量有关,植入smg才有明显成骨作用,但其成骨诱导活性与相同剂量的普通猪BMP相比无明显差别。
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