【摘 要】
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目的: 人类巨细胞病毒糖蛋白UL-16结合蛋白-3(ULBP3)是最近发现的NK细胞表面重要活化性受体NKG2D的配体，在受多种病毒感染后的组织细胞或恶性肿瘤细胞表面都可表达上调，是一
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目的: 人类巨细胞病毒糖蛋白UL-16结合蛋白-3(ULBP3)是最近发现的NK细胞表面重要活化性受体NKG2D的配体，在受多种病毒感染后的组织细胞或恶性肿瘤细胞表面都可表达上调，是一种重要的压力诱导蛋白。本课题旨在研究ULBP3在肿瘤中的表达以及对NK细胞杀伤活性的调节作用。 方法: 1.ULBP3在肿瘤中的表达:采用流式检测肿瘤组织和肿瘤细胞株膜表面ULBP3的表达;采用时间分辨荧光免疫分析检测游离型ULBP3(sULBP3)在肿瘤细胞株培养上清和肿瘤病人血清中的含量;采用免疫组化检测肿瘤病人组织中ULBP3的表达;采用PCR方法检测肿瘤细胞株和肿瘤组织中ULBP3基因的含量。 2.NK细胞毒性检测试验:采用LDH释放实验检测不同浓度sULBP3蛋白(ULBP3-Fc)和不同表达量的膜型ULBP3分别处理对NK细胞杀伤活性的影响，以及ULBP3单克隆抗体对其调节作用。 3.流式检测不同浓度sULBP3处理后对NK细胞表面表达NKG2D的影响。 4.流式检测肿瘤组织浸润NK细胞数量与ULBP3表达的相关关系。 结果: 1.ULBP3不同程度的表达在结肠癌细胞株CD133-SW620和CD133+SW620以及肝癌细胞株7721细胞膜表面，而不表达在食管癌ECA109、肺癌A549、红白血病K562细胞株细胞膜表面;并且在肠癌、肝癌、肺癌和胃癌组织中ULBP3表达明显高于癌旁组织。sULBP3普遍存在于胃癌、肠癌、肺癌病人血清中，明显高于健康对照组(P＜0.001);sULBP存在于结肠癌细胞株CD133-SW620、CD133+SW620、肝癌细胞株7721培养上清液中，但不存在于肺癌A549、红白血病K562、食管癌ECA109细胞株以及静息和活化的NK细胞培养上清中。ULBP3 mRNA表达于CD133-SW620、CD133+SW620、7721细胞株和结肠癌组织中，而在K562、A549、ECA109和癌旁组织中均不表达。 2.膜型ULBP3通过NKG2D途径介导了NK细胞对靶细胞的识别和杀伤作用，并且NK细胞的杀伤活性随肿瘤细胞表面ULBP3表达量的增多而增强。 3.低浓度sULBP3（＜15ng/ml）通过下调NKG2D的表达可以降低NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，而高浓度的sULBP3(＞15ng/ml)对NK细胞的杀伤活性没有影响。 4.肿瘤组织中NK细胞浸润的数量与ULBP3的表达量成负相关关系。 5.ULBP3单克隆抗体通过中和sULBP3和介导ADCC效应能够增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。 结论: ULBP3以膜型和游离型两种形式在肿瘤中普遍存在，并能够调节NK细胞的杀伤活性，为研究ULBP3在肿瘤治疗和诊断中具有的潜在临床价值提供了理论依据。
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