论文部分内容阅读
目的探讨孕期心理应激对0-1岁子代情志和认知发育的影响及其机制,为临床预防子代情志和认知类疾病提供指导。方法以长住郑州且在河南中医药大学第一附属医院住院分娩孕晚期待产妇及其子代为研究对象。运用量表测评和生化指标的检测方法获得孕母和子代的各项参数,并使用统计学方法进行二者之间的相关分析,运用i TRAQ联合串联质谱技术比较应激组和非应激组胎盘蛋白质表达差异。1)采用量表对母子两代情志和认知进行测评:(1)对孕母的量表测评:使用蒙特利尔认知功能量表(Mo CA)初步筛查孕妇认知情况,排除认知异常的孕妇;运用中国修订韦氏成人智力量表(WAIS-RC)评价孕妇智力程度,排除智力缺陷的孕妇;对符合纳入标准的390例受试者采用症状自评量表(SCL-90)评分,将其分为对照组230例和应激组160例,用生活事件量表(LES)评价孕妇经历的负性生活事件。(2)对子的量表测评:从每组中随机选择80例子代,采用0-6岁幼儿发育筛查量(DST)表初步筛查子代生长发育情况,运用中国婴儿气质量表和GESELL发育诊断量表(GDS)评价子代情志和认知情况。2)采用生化技术对母亲HPA轴和胎盘功能测评:(1)使用电化学发光法,检测血清皮质醇(COR)、血浆促肾上腺皮质激素(ACTH),用放射免疫法检测儿茶酚胺(肾上腺素、多巴胺、去甲肾上腺素),分析孕母HPA轴功能;(2)运用微粒子化学发光法,检测孕母血清FE3,评估孕母胎盘功能。3)采用i TRAQ联合串联质谱技术对胎盘蛋白质表达进行检测:(1)运用相对和绝对定量同位素标记(i TRAQ)联合串联质谱(MS/MS)技术,筛选鉴定差异表达蛋白;(2)采用Cytoscape软件对差异表达蛋白进行相互作用分析;(3)通过检索GO数据库,对差异表达蛋白进行功能注释寻找差异蛋白主要功能;(4)通过对KEGG的Pathway数据库检索,分析差异表达蛋白富集到的生物通路。结果1孕妇组间比较:(1)与全国常模比较,390例孕妇症状自评量表的躯体化、焦虑、恐怖和精神病性因子均值均明显偏高,差异有统计学意义(P<0.05);390例孕妇症状自评量表的人际关系和偏执因子均值均明显偏低,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组比较,应激组孕妇生活事件的负性值明显偏高,差异有统计学意义(P<0.05);孕妇孕期经历的主要负性事件位于前三列的分别是工作学习压力大、家庭成员重病或重伤和欠债500元以上或房贷;(3)与对照组比较,应激组孕妇血清COR水平及血浆中ACTH、肾上腺素(AD)、多巴胺(DOP)和去甲肾上腺素(NAD)水平均偏高,差异有统计学意义(P<0.05);(4)与对照组比较,应激组孕妇血清中的FE3水平明显偏低,差异有统计学意义(P<0.05)。2胎盘蛋白质组学研究结果:(1)i TRAQ标记联合串联质谱鉴定结果:在unihuman9606数据库中匹配的蛋白质总数为1904种,筛选鉴定出168种差异表达蛋白,其中,74种表达上调,94种表达下调。(2)差异表达蛋白相互作用网络分析:对168种差异表达蛋白进行互作网络分析,92种差异表达蛋白存在相互作用且构建出相互作用网络。其中,丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶1α(PP1α)催化亚基、14-3-3ε蛋白、核仁素蛋白和热激蛋白的点度中心度较大,因此与此四种蛋白有直接作用的蛋白质较多,且发挥调节作用也较大。(3)差异表达蛋白的GO功能富集分析:168种差异表达蛋白共涉及39种细胞组分、165种生物过程和21种分子功能。其中,按P<0.05且P值由小到大顺序分析前20种蛋白质富集功能,(1)39种细胞组分中的前20种细胞组分主要涉及了细胞器、细胞骨架、高分子复合物等;(2)165种生物过程中的前20种生物过程主要涉及了生物合成过程、组织生长发育过程、细胞生物过程等;(3)21种分子功能中的前20种分子功能主要涉及了蛋白结合、蛋白活性、结构成分等。(4)差异表达蛋白的生物通路富集分析:168个差异表达蛋白共涉及10种生物途径(P<0.05):核糖体信号通路、血小板活性、肌动蛋白细胞骨架调控、心肌细胞的肾上腺素能信号通路、胃酸分泌、血管平滑肌收缩、癌症相关的蛋白聚糖信号通路、TRP通道的炎症介质调节通路、催产素信号通路和致病性大肠杆菌感染。3两组子代间的比较:⑴两组子代情志和气质(易养型、中间型、启动缓慢型和难养型)比较:(1)与对照组比较,应激组子代心境的消极性程度显著偏高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)与对照组比较,应激组子代易养型数量较少,而中间型、难养型和启动缓慢型数量明显偏多;与对照组比较,应激组子代气质的9个维度水平均显著偏高,差异有统计学意义(P<0.05)。⑵两组子代的认知比较:(1)与对照组比较,应激组DST中的发育商水平明显偏低,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组比较,应激组GDS中的适应性行为、语言行为、社交行为均显著偏低,差异有统计学意义(P<0.05)。4孕母与子代各参数的相关性分析:⑴孕母各指标间的相关分析:(1)孕母SCL-90各因子与LES负性值呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05);(2)孕母LES负性值与其血清中FE3水平呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05);(3)孕母LES负性值与其血清COR水平、血浆ACTH、AD及DOP呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)子代情志(中国婴儿气质量表中的心境)与孕母SCL-90各因子、孕母LES负性值和孕母激素的相关分析:(1)子代CITS中的心境与孕母SCL-90中的9个因子均呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05);(2)子代CITS中的心境与孕母LES负性值呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05);(3)子代CITS中的心境与孕母血浆中AD和DOP水平呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05);(3)子代认知(GDS各因子)与孕母SCL-90中各因子、孕母生活事件负性值和孕母激素的相关分析:(1)子代GDS中的适应性行为、语言行为和社交行为与孕母SCL-90各因子均呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05);子代GDS中的大运动行为与孕母SCL-90中的除了偏执和精神病性外的其他7个因子呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05);子代GDS中的精细动作与孕母SCL-90中的躯体化、强迫状态、人际关系、焦虑和敌对呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05);(2)子代GDS中的适应性行为、大运动、语言行为、社交行为与孕母LES的负性值呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05);(3)子代GDS中的适应性行为、语言行为和社交行为与孕母血清FE3水平呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05);(4)子代GDS中大运动、语言行为和社交行为与孕母血清COR呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05);子代GDS中的适应性行为和社交行为与孕母血浆ACTH水平呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05);子代GDS中适应性行为、语言行为和社交行为与孕母血浆AD和DOP均呈负相关,子代GDS中大运动与孕母血浆DOP呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05);子代GDS中语言行为和社交行为与孕母血浆NAD水平呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05);结论1孕期心理应激对孕母HPA轴功能产生不良影响。2孕期心理应激对胎盘功能产生不良影响。3孕期心理应激与子代情志和认知发育密切相关,孕期心理应激对0-1岁子代情志和认知发育有不良影响。4孕期心理应激可通过影响丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶1α(PP1α)催化亚基、14-3-3ε蛋白、核仁素、热激蛋白等蛋白质的表达及核糖体信号通路、血管平滑肌收缩通路、催产素信号通路等多条通路对胎盘功能产生影响,进而影响子代情志和认知发育。