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目的:研究重组AdipoQ基因在真核细胞中的表达情况,利用电穿孔的方法将表达载体导入减毒沙门氏菌并表达,纯化蛋白,检测其在体外对L-02肝细胞脂肪变性的抑制作用,为人AdipoQ在NAFLD的基因治疗方面的应用奠定基础。方法:(1)从人脂肪组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法获得AdipoQ基因,将其克隆到真核荧光表达载体pEGFP-N1上,构建重组质粒pEGFP-N1- AdipoQ;(2)将重组质粒转染COS-7细胞,通过报告基因荧光蛋白的表达、RT-PCR和Western blot检测其融合蛋白在真核细胞中的表达;(3)将重组质粒pEGFP-N1- AdipoQ通过电穿孔的方法导入减毒沙门氏菌并表达;(4)通过亚克隆法构建重组质粒pET32a(+)-AdipoQ ,转化大肠杆菌BL21 ,以IPTG诱导表达pET32a(+)-AdipoQ融合蛋白。表达产物经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,用Western Blot分析;(5)将融合蛋白作用于油酸诱导脂肪变的L-02肝细胞,研究其对肝细胞脂肪变的抑制情况。结果:(1)通过RT-PCR方法克隆得到AdipoQ基因片断,长度为744bp,与目的基因片段大小相一致;(2)重组质粒pEGFP-N1- AdipoQ构建成功,AdipoQ在真核细胞中表达,并与荧光蛋白融合;(3)携带AdipoQ基因真核表达载体的减毒沙门氏菌株构建成功;(4)纯化pET32a(+)-AdipoQ融合蛋白;(5)AdipoQ对油酸诱导脂肪变的L-02肝细胞有抑制作用。结论:采用油酸诱导L-02肝细胞株能够成功制作培养的肝细胞脂肪变模型。在肝细胞脂肪变模型中加入重组脂联素蛋白,肝脂肪变性程度减轻,由此可见脂联素对NAFLD有抑制作用。