【摘 要】
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在膀胱癌患者尿液中的MMP1(基质金属蛋白酶1)最近被证明同膀胱癌进程密切相关,可以做为新型膀胱癌生物标志物。MMPs的小分子探针检测是一种非侵入性的,高灵敏度和特异性,且操作简
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在膀胱癌患者尿液中的MMP1(基质金属蛋白酶1)最近被证明同膀胱癌进程密切相关,可以做为新型膀胱癌生物标志物。MMPs的小分子探针检测是一种非侵入性的,高灵敏度和特异性,且操作简便,费用低廉的检测技术,但是尿液中的MMP1检测还不具备小分子探针,目前只能通过传统的、费时的方法,如酶联免疫吸附分析和免疫印迹。明胶酶谱方法是一种替代小分子探针检测的高敏性MMP1检测方法。本文通过分离人胚胎肾细胞(HEK293)中MMP1基因的cDNA序列,在大肠杆菌中表达了分子探针的筛选靶点MMP1,并对体外表达MMP1和尿液中(人体内源表达)MMP1进行了酶谱分析。研究发现融合TrxA蛋白有助于获得高纯度的可溶型MMP1;对可溶的MMP1和包涵体复性的MMP1以及尿液中的MMP1活性进行明胶酶谱分析,结果显示可溶MMP1比复性MMP1对明胶的降解活性增加了1.54倍,并且更接近尿液中的MMP1。因此,本研究利用明胶酶谱成功检测了体外和体内MMP1的活性,并且为筛选MMP1的小分子探针提供了一个可靠的分子靶点。
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