马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）是重要的植物病毒之一,对我国烟草生产造成重大经济损失。烟草NtTCTP是前期发现对PVY具有抗性的基因,但其机制尚不清楚。通过筛选与NtTCTP互作的寄主因子,研究其抗病功能,有助于解析NtTCTP抗PVY的机制、培育对PVY具有抗性的烟草。通过构建酵母双杂交文库,以NtTCTP为诱饵,筛选出与NtTCTP互作的寄主因子,通过验证、测序对其中NtFBA6蛋白进行深入研究。从栽培烟草“云烟87”叶片cDNA中克隆NtFBA6基因,利用同源重组的方法对NtFBA6和p ET32a片段进行原核表达载体构建。经1m M IPTG诱导过夜,采用Ni-NTA亲和层析对获得的蛋白进行纯化,SDS-PAGE检测纯化结果,通过BCA法测定纯化的NtFBA6蛋白浓度。此外,通过质谱分析推测PVY编码的CI与NtTCTP能发生互作。根据原核生物的偏好性,在不改变氨基酸序列的基础上,选择CI序列突变的碱基,对CI序列进行改造,对优化的CI和p EU-E01-GST-PS-MCS-NI进行真核表达载体的构建,经无细胞蛋白表达系统表达蛋白。本研究成功构建烟草酵母双杂交文库,从酵母文库中筛选出4个与NtTCTP互作的寄主因子:NtFBA6、NtFBA1、HCF164、19 k Da蛋白,对其中的NtFBA6蛋白进行深入研究,成功构建p ET32a-NtFBA6原核表达载体。经IPTG诱导过夜,成功表达了烟草的NtFBA6蛋白。通过亲和层析纯化,成功去除了其中的杂蛋白,获得纯NtFBA6蛋白溶液,浓度为388.27 ug/m L。CI编码序列在原核生物体内会被翻译成某些有毒成分,难以开展载体构建工作,通过优化CI序列,成功构建CI真核表达系统。高纯度NtFBA6蛋白的获得,为研究NtFBA6蛋白的结构及功能奠定了基础,也为进一步探索烟草NtFBA6与NtTCTP的互作机理以及对PVY的抗病机理具有重要意义。CI蛋白的成功表达,为CI蛋白的纯化及后续研究CI蛋白的结构与功能提供了前提条件,对进一步探索CI与NtTCTP互作机理具有重要意义。