板栗、茶叶和柿子多酚氧化酶基因克隆与分析

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该研究根据赵东报道的茶树临海水古茶多酚氧化酶基因序列片段以及已公开发表的其它植物多酚氧化酶基因序列设计两组特异引物:CuA区引物(R<,3>R<,1>)和CuB区引物(F<,2>R<,5>),从板栗的农大1号、双季板栗、铁粒头品种及市售板栗果肉、茶叶的南昆山毛叶茶、英红9号、福云6号、岭头单枞品种以及日本柿子基因组水平克隆获得多酚氧化酶基因的保守区域片段,主要结果如下:1.从农大1号、双季板栗、铁粒头以及市售板栗果肉四个材料中分别克隆获得板栗多酚氧化酶基因CuB保守区域576bp大小的片段.2.从南昆山毛叶茶、福云6号、岭头单枞三个茶树品种中分别克隆获得包含多酚氧化酶基因CuA和CuB保守区域共1000bp大小的片段,另外从英红9号中克隆获得CuB保守区域576bp大小的片段.3.从日本柿子中克隆获得多酚氧化酶基因CuA保守区域492bp大小的片段.4.同源性比较得出:三个板栗材料、四个茶树品种、日本柿子多酚氧化酶基因与赵东报道的临海水古茶多酚氧化酶基因核苷酸序列的同源性均在96%以上,氨基酸序列同源性均在85%以上;板栗不同材料间PPO基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为98%-99%和97%-99%;茶树不同品种间PPO核苷酸序列同源性均在96%-99%,氨基酸序列同源性为89%-98%;茶树不同品种与板栗不同材料和柿子两个不同物种的PPO基因核苷酸序列同源性均在95%以上,氨基酸序列同源性均在77%以上.5.首次在分子水平对不同板栗品种进行聚类分析和亲缘关系比较,结果表明铁粒头和农大1号的亲缘关系比较近,而双季板栗与它们的亲缘关系稍远.6.对四个茶树品种多酚氧化酶基因分别在氨基酸序列和核苷酸序列水平上进行多重比较并绘制出它们的分子进化树图,结果表明氨基酸进化树与核苷酸进化树的结果一致,均为福云6号与岭头单枞聚为一类,亲缘关系最近;它们与南昆山毛叶茶的亲缘关系稍远,与英红9号的亲缘关系最远.
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