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目的:本试验主要应用HE染色方法观察经过电离辐射后始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡及窦状卵泡的数目变化情况,免疫组化方法检测大鼠卵巢颗粒细胞内的凋亡小体的表达情况,并用P53、Bcl-2免疫组化方法探讨卵巢颗粒细胞中P53蛋白及Bcl-2蛋白的表达情况,以探讨剂量在0.2～1.0 Gy的X线电离辐射对卵巢形态和功能的影响。方法:1、实验动物的分组和处理:将实验动物大鼠60只随机分为6组,每组10只,进行不同剂量X线照射,照射电压220v,靶皮距100mm,剂量率为2.3 Gy/min,第一组为未照射组,放置时间等同于第二组的照射时间,第二组接受放射线吸收剂量为0.2 Gy,第三组为0.4 Gy,第四组为0.6 Gy,第五组为0.8Gy,第六组为1.0 Gy。照射15天后(三个动情周期),给予4%戊巴比妥钠0.7～1.5ml进行腹腔注射麻醉,碘伏消毒大鼠背部,自背部剪开皮肤和肌肉组织,进入腹腔,取出双侧卵巢,在培养皿中用生理盐水清洗后取出,去除卵巢周围脂肪。分别用4%多聚甲醛进行固定,24小时后取出,进行包埋,切片。2、HE染色方法:将切片放入Harris苏木素染液浸染后经过流水冲洗、盐酸乙醇分色后再放入伊红溶液中浸染,水流冲洗后经乙醇分化脱水,固封切片后在光镜下对各级卵泡进行计数,观察始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡、窦状卵泡的数目变化;3、TUNEL法:应用凋亡的原位酶标记的方法,用DNA聚合酶和末端脱氧核酸转移酶(TdT)标记DNA链断端的核酸,然后应用TdT进行的末端反应,来优先标记凋亡早期细胞检测卵巢颗粒细胞中凋亡小体的表达情况;4免疫组化方法:将切片脱蜡至水后用PBS进行复水及打孔,进行抗原修复及加入一抗,经PBS冲洗,加入二抗培养后用SABC的方法进行染色,检测颗粒细胞中的P53蛋白及Bcl-2蛋白表达的情况。5对免疫组化的图像进行图文分析,计算出光密度值和灰度值,并进行统计学分析。结果:(1)X线电离辐射(0.2Gy～1.0Gy)可使始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡的数目减少(P<0.01),以始基卵泡减少为著。不同剂量X线照射后窦状卵泡的数目与假照射组无明显改变(P>0.05)。吸收剂量达0.4Gy～1.0Gy后,卵巢颗粒细胞中存在核空泡。(2)吸收剂量为0.2Gy时,卵巢颗粒细胞中P53蛋白表达水平低于假照射组(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平高于假照射组(P<0.05)。(3)吸收剂量达到0.4~1.0 Gy后,卵巢颗粒细胞内P53蛋白的表达水平明显高于假照射组,且随吸收剂量的增加表达量增加(P<0.01);Bcl-2蛋白的表达水平明显低于假照射组,且随吸收剂量的增加表达水平下降(P<0.01)。(4)吸收剂量为0.2 Gy时,卵巢颗粒细胞中凋亡小体量低于假照射组(P<0.01);吸收剂量达到0.4~1.0 Gy后,凋亡小体量表达水平明显高于假照射组,且随吸收剂量的增加表达量也增加(P<0.01)。结论:剂量在0.4~1.0 Gy之间的电离辐射时可使卵巢颗粒细胞凋亡增多,并减少始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡的数目,从而对卵巢造成损伤,如造成部分卵巢细胞损伤,则会影响今后受孕能力,即使受孕对胚胎发育的质量也存在着一定的危险性,如发生全部损伤,则可能导致卵巢早衰,影响性腺激素分泌功能的调节。在临床上按吸收剂量来说,从小到大依次为普通放射线检查、X线透视、CT检查。最小剂量为2.31～5.35 mGy,最大剂量为4 Gy。从实验结果来看,当吸收剂量等于0.2Gy时已经造成卵泡数目的减少,吸收剂量大于0.4Gy时可导致颗粒细胞发生凋亡,因此在做放射线检查时,对盆腔及其它重要器官做出防护是势在必行的。