第一部分：c-myc在冠脉搭桥术后桥血管再狭窄中的作用目的：研究c-myc蛋白在冠脉搭桥术后再狭窄中作用。方法：将25只健康纯种新西兰大耳白兔按体重随机分5组,每组5只。将颈外静脉置于同侧颈总动脉,分别在术后6h、2天、7天、14天、28天取材。应用免疫组化和形态学分析观察不同时间c-myc阳性细胞数的表达,采用计算机图象分析法测量管腔内膜、中膜厚度及比值。结果：7天时内膜和中膜厚度较6h明显增厚(P<0.01),而在14天、28天时较7天没有明显变化(P>0.05)。6h-7天c-myc蛋白逐渐增多,于7天达高峰(P<0.01),14～28天开始下降,与7天相比差异有显著意义(P<0.01)。结论：c-myc阳性细胞数在移植后7天达高峰,这种现象与内膜迅速增殖的高峰期一致,这说明c-myc蛋白表达与内膜增殖有密切联系,可用作早期反应血管损伤导致内膜增殖的监测指标；第二部分：活化的内皮细胞条件培养液中ET-1对平滑肌细胞增殖及c-myc表达的影响目的：研究内皮细胞条件培养基中ET-1对血管平滑肌细胞的细胞增殖以及细胞中c-myc蛋白表达的影响及其机制。方法：首先我们利用TNF-a刺激内皮细胞,用ET-1 ELISA试剂盒检测培养液上清中ET-1的表达,依次来确定TNF-α刺激内皮细胞的最佳剂量以及最佳时间。最后确认终浓度为10ng/ml,刺激时间为24h时,内皮细胞分泌ET-1的效果最好。接着我们以终浓度为10ng/ml和0ng/ml的TNF-α来刺激人大隐静脉内皮细胞,收集细胞培养的上清液。我们将10ng/mlTNF-α刺激人大隐静脉内皮细胞24h所得的条件培养液称之为A液,而0ng/mlTNF-α刺激人大隐静脉内皮细胞24h所得的条件培养液称之为B液,继续后续的细胞实验；将人大隐静脉平滑肌细胞接种于细胞培养板中分为四组：①刺激组：按1：1加入A液和DMEM细胞培养基；②拮抗组：按1：1加入A液和DMEM细胞培养基,同时加入抗ET-1单克隆抗体(50ng/m1)；③对照组：按1：1加入B液和DMEM细胞培养基；④空白组：仅加入无血清的DMEM培养基。分组后,继续培养24h收集平滑肌细胞,分别用MTT法检测平滑肌细胞的细胞增殖情况,RT-PCR技术检测平滑肌细胞中c-myc mRNA及c-myc蛋白的表达。结果：1.TNF-α刺激人大隐静脉内皮细胞并释放细胞因子ET-1具有剂量和时间依赖性,①剂量效应：ET-1的释放量随着TNF-α刺激量的增加而加大,刺激量为0ng/m1、5ng/m1、10ng/m1、20ng/m1、40ng/ml且刺激时间为24h时,ET-1的分泌量分别为23.41±1.03、53.98±0.97、71.78±1.09、76.77+1.00、69.66+1.04。②时间效应：而当刺激量为10ng/ml恒定时,ET-1的释放量随着TNF-α刺激时间的延长而增加,刺激时间为0h、6h、12h、24h、48h时,ET-1的释放量分别为12.29±0.91、45.42±1.33、55.98±0.91、71.78±1.09、67.45±1.24；2.内皮细胞条件培养基中ET±1促进了人大隐静脉平滑肌细胞中c-myc mRNA的表达,四组细胞中c-myc mRNA的相对表达量分别为9.435±0.625、6.285±0.585、3.165±0.195、1,刺激组细胞中c-myc mRNA的相对表达量显著性高于拮抗组、对照组和空白组(p<0.05)；3.内皮细胞条件培养基中ET-1促进了人大隐静脉平滑肌细胞中c-myc蛋白的表达,四组细胞中c-myc蛋白的相对表达量分别为1.002±0.0695、0.789±0.0240、0.292±0.0225、0.112±0.0115,刺激组细胞中c-myc蛋白的相对表达量明显高于对照组和空白组,差异有统计学意义(p<0.05)；4.内皮细胞条件培养基中ET±1促进了人大隐静脉平滑肌细胞细胞增殖,四组细胞中OD490分别为1.455±0.077、1.153±0.064、0.964±0.067、0.618±0.043,刺激组细胞中OD490值明显高于对照组和空白组,差异有统计学意义(p<0.05)结论：TNF-α刺激人大隐静脉内皮细胞释放ET-1具有剂量及时间依赖性,内皮细胞条件培养基中ET±1能够促进c-myc mRNA蛋白的表达,而且内皮细胞条件培养基中ET±1促进了平滑肌细胞的细胞增殖。第三部分：RNA干扰抑制c-myc基因对人大隐静脉平滑肌细胞生物活性的影响目的：第一部分研究发现c-myc高表达与冠脉搭桥术后再狭窄有关,它可能是内膜增殖的一个指标,而内膜增生最主要的原因是中膜的平滑肌细胞游移到内膜,并大量增殖。本研究旨在研究RNA干扰抑制c-myc基因对人大隐静脉平滑肌细胞增殖、凋亡的影响,为预防冠脉搭桥术后再狭窄提供理论依据和方法。方法：利用Invitrogen公司网站上的设计工具对针对c-myc基因的siRNA序列进行在线设计并合成,同时合成与c-myc基因无关的siRNA阴性序列作为阴性对照,经Lipofectamine 2000脂质体转染到人大隐静脉平滑肌细胞中,应用倒置荧光显微镜观察以检测转染效率,应用MTT法及细胞集落形成计数来检测c-myc siRNA对平滑肌细胞增殖的影响；应用RT-PCR及western blot检测c-myc siRNA转染平滑肌细胞前后c-myc基因mRNA及蛋白表达的变化；最后应用流式细胞术分析转染c-myc siRNA后对细胞凋亡的变化。结果：1. c-myc siRNA转染人大隐静脉平滑肌细胞的转染效率是88%±2.43,转染效果很好；2. c-myc siRNA转染人大隐静脉平滑肌细胞后,显著性抑制了人平滑肌内皮细胞的增殖,并且抑制率具有时间依赖性,转染后24h、48h和72h的增殖抑制率分别是25.92±3.373、53.66±1.822、50.83±0.236,显著性高于阴性对照组和正常对照组(p<0.05)；3.c-myc siRNA转染人大隐静脉平滑肌细胞后,显著性抑制了人平滑肌内皮细胞的集落形成,正常对照组、阴性对照组和c-myc siRNA转染组的平滑肌细胞的集落形成率分别是15.00±1.323、14.33±1.364、2.0±0.289,转染组的细胞集落形成率显著性低于阴性对照组和正常对照组,差异有统计学意义(p<0.05)；4. c-myc siRNA转染人大隐静脉平滑肌细胞后,显著性抑制了人平滑肌内皮细胞c-myc mRNA的表达,并且具有时间依赖性,正常对照组、阴性对照组及c-myc siRNA在转染后24h、48h及72h三组的c-myc mRNA的相对表达量分别为1、0.9633±0.0151、0.8580±0.0104、0.5863±0.0109、0.2007±0.0084,转染组的c-myc mRNA的相对表达量显著性低于阴性对照组和正常对照组(p<0.05)；5.c-myc siRNA转染人大隐静脉平滑肌细胞后,显著性抑制了人平滑肌内皮细胞c-myc蛋白的表达,并且具有时间依赖性,正常对照组、阴性对照组及c-myc siRNA在转染后24h、48h及72h三组的c-myc蛋白的相对表达量分别为0.7105±0.0215、0.6570±0.0150、0.4155±0.0095、0.2225±0.0095、0.1050±0.0070,转染组的c-myc蛋白的相对表达量显著性低于阴性对照组和正常对照组(p<0.05)；6.c-myc siRNA转染人大隐静脉平滑肌细胞后,显著性促进人平滑肌内皮细胞的细胞凋亡,正常对照组、阴性对照组和c-myc siRNA转染组的平滑肌细胞的细胞凋亡率分别是13.30±0.875、14.46±1.200、42.54±1.354,转染组的细胞凋亡率显著性高于阴性对照组和正常对照组(p<0.05)。结论：1.c-myc siRNA能够显著性抑制平滑肌细胞的细胞增殖与细胞集落形成；2. c-myc siRNA能够显著性抑制平滑肌细胞中c-myc mRNA及c-myc蛋白的表达,并且具有时间依赖性；3.c-myc siRNA具有诱导平滑肌细胞细胞凋亡的作用。