论文部分内容阅读
鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)是我国南方高发恶性肿瘤之一，严重危害了人民的健康。利用单克隆抗体对肿瘤进行放射免疫显像和治疗在肿瘤的诊治领域中展现了广阔的前景。本实验室利用基因重组技术构建了抗鼻咽癌单克隆抗体BAC5的单链抗体(single-chainFvantibodyfragement，ScFv)的原核表达载体，并转入大肠杆菌中进行诱导表达，得到了以包涵体形式表达的无活性的BAC5-ScFv。如何对其进行纯化，复性，使其成为有免疫活性的抗体应用于鼻咽癌的放射免疫显像和治疗有重要的意义。本文主要内容如下：1.本实验对转有pET22b-ScFv质粒的细菌BL21(DE3)进行诱导表达，得到以包涵体形式表达的BAC5-ScFv，分子量为31KD左右，包涵体中BAC5-ScFv占70％。2.用Ni-NTAHisBind亲和层析柱纯化变性的单链抗体蛋白，SDS-PAGE检测其纯度达90％。3.变性单链抗体的最佳复性液的组成为：50mmol/LTris-HCL，1mmol/LEDTA，0.3mol/LNacl，1mmol/LGSSG，1mmol/LGSH，0.4mol/LL-精氨酸pH8.0。稀释、透析和尿素梯度凝胶柱三种复性方法对纯化的变性单链抗体进行复性的蛋白回收率分别为：35.64％、21.46％和59.32％。4.免疫细胞化学染色法和westernblot检测复性后的BAC5-ScFv有和BAC5单克隆抗体一样的结合鼻咽癌细胞株CNE2的免疫活性。其滴度比相同浓度的BAC5下降约100倍。5.125I-BAC5-ScFv在荷有人鼻咽癌肿瘤的裸鼠体内的生物学分布表明：125I-BAC5-ScFv可以在肿瘤部位浓集，肿瘤与正常组织的的T/NT比值随时间而增高，肿瘤与血和肌肉的T/NT在24h为2.67和11.40。