安息香总香脂酸的提取纯化工艺及其脑保护作用研究

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目的:研究安息香中主要成分总香脂酸的提取纯化工艺及其脑保护作用。方法:①总香脂酸评价方法的建立 以重量法(药典法)为参照,建立紫外分光光度法(UV)测定安息香总香脂酸含量;以高效液相色谱法(HPLC)测定总香脂酸中苯甲酸含量。②总香脂酸提取工艺 以总香脂酸和苯甲酸转移率为指标,在预试基础上,采用溶剂提取法,对不同提取溶剂、不同提取方法进行考察后进一步对提取溶剂浓度、用量、提取时间三个主要影响因素进行正交设计实验,以确定安息香总香脂酸最佳提取工艺的各项参数。③总香脂酸纯化工艺 以总香脂酸、苯甲酸吸附量和洗脱率为指标,对树脂种类、上样液pH、浓度、上样量、上样流速、解吸附剂用量、洗脱剂体积分数及用量进行考察,以确定总香脂酸最佳纯化工艺参数。④总香脂酸脑保护作用研究选用小鼠急性脑缺血模型、小鼠常压耐缺氧模型进行实验,考察总香脂酸对小鼠存活时间的影响。结果:①总香脂酸评价方法的建立UV法检测波长为223nm,回归方程为A=66.750C+0.0377(r=0.9991);HPLC法回归方程为Y=5839.9X-259.06(r=0.9994)。UV法与重量法相比较,P=0.437(>0.05),即认为两种方法测定结果无显著性差异,提示UV法可用于测定安息香总香脂酸含量。②总香脂酸提取工艺 最佳提取工艺参数为:氢氧化钠浓度为0.75mol/l、溶媒用量为15倍、提取时间为1h,提取1次。③总香脂酸纯化工艺 最佳纯化工艺参数为:上样液pH为12、上样液浓度为0.02g/m1、上样量8BV、上样流速为2BV/h、3BV去离子水除杂、2BV的稀盐酸解吸附、6BV的95%乙醇洗脱。纯化后,总香脂酸平均纯度达73.49%,纯化倍数达2.78;苯甲酸平均纯度达63.97%,纯化倍数达2.95。④总香脂酸脑保护作用研究与溶媒对照组比较,总香脂酸组、安息香组、冰片组对抗小鼠急性脑缺血、缺氧作用均不明显,但一定程度上延长了小鼠存活时间;而总香脂酸-冰片配伍组、安息香-冰片配伍组对抗小鼠急性脑缺血、缺氧作用明显,能够显著延长小鼠存活时间;总香脂酸组与安息香组比较、总香脂酸-冰片配伍组与安息香-冰片配伍组比较,P值均大于0.05,表明总香脂酸与安息香生药在药效学上无显著性差异,但总香脂酸对小鼠存活时间有延长趋势,与课题组前期研究结果一致;上述结果表明总香脂酸为安息香有效成分,且进一步验证了冰片的“引药入脑、佐使有功”的作用。结论:①UV法与重量法对总香脂酸含量测定的结果无显著性差异,但重量法步骤繁琐、周期长而UV法操作步骤减少、周期缩短,测定结果准确可靠,可用于安息香总香脂酸的含量测定。②提取工艺科学合理,稳定可靠,提取效率高;717型阴离子交换树脂对安息香总香脂酸的纯化效果好,周期短,成本低,为后期开展总香脂酸脑保护作用的研究奠定了基础。③总香脂酸较安息香生药而言,药效学上虽然无显著性差异,但在一定程度上也延长了小鼠存活时间,提示总香脂酸可能为安息香有效成分,且进一步验证了冰片“引药入脑、佐使有功”的作用,对后期安息香开展深入研究奠定了实验基础。
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