论文部分内容阅读
目的:探讨及分析透明细胞肾细胞癌(ccRCC)特异性长链非编码RNA(lncRNA)在肾癌及癌旁组织中的表达差异,以及可能的分子机制,筛选出有差异表达的lncRNA基因,初步验证并建立可靠的ccRCC的lncRNA表达谱。方法:利用高通量lncRNA芯片技术分别检测3例ccRCC组织及对应癌旁组织中lncRNA表达谱的差异,对芯片结果进行基因本体论(Gene Ontology),通路(Pathway)分析,建立lncRNA与靶基因的基因网络图,并利用实时荧光定量RT-PCR技术对87例ccRCC患者组织标本水平进行微阵列检测结果的验证。应用Pearson相关性分析lncRNA的水平与ccRCC转移显著相关性。Kaplan-Meier生存分析法用于生存时间相关性。结果:ccRCC患者癌组织与癌旁对照样本间差异表达的lncRNA共3862个,其中1619个上调表达,2243个下调表达(差异表达倍数≥2.0,p<0.05)。其中表达差异最稳定且变化倍数最大的6个IncRNA分子分别是:上调基因LINC00944,AC011196.3,SNHG12;下调基因LINC01020,NPSR1-AS1,NONHSAT123350。实时荧光定量qRT-PCR结果显示,该研究筛选出的6个lncRNA在87例ccRCC样本中的表达差异与芯片检测结果一致。Pearson相关性分析发现仅NONHSAT123350的水平与ccRCC转移显著相关(r=0.92,P=0.0101),而与患者性别、年龄等因素无关。未发生转移的肾透明细胞癌患者中NONHSAT123350高表达组占26%,低表达占74%。生存分析结果显示,相对于低表达组,高表达组术后生存时间更长,两组术后中位生存时间分别是17.6个月(95%CI,13.6~21.3)和26.9个月(95%CI,23.2~30.1),差异具有统计学意义(P=0.0015)。结论:在透明细胞肾细胞癌ccRCC组织与癌旁组织中存在大量差异表达的1ncRNA与mRNA,在下调lncRNAs中,NONHSAT123350在ccRCC组织中表现为低表达。这种低表达可能与肿瘤的侵袭转移等恶性生物学行为相关。NONHSAT123350在肾癌细胞株786-O表达丰度最高,在Caki-1中基础表达丰度最低因此这两株细胞可望成为后续基因研究的重点细胞株。