伪狂犬病毒(PRV)是伪狂犬病或奥耶斯基病的重要病原。PRV感染猪致病性极强，可引起猪产生呼吸、繁殖障碍、出现神经症状等。近年来，由于变异毒株的出现，使PRV的致病力发生了变化，增加了PR的防控难度。自噬(Autophagy)是真核细胞对不利环境的自我保护反应。自噬不仅在清除入侵的病原体，维持细胞内稳定具有重要作用，而且在抵抗病毒和胞内细菌感染中发挥着重要的天然免疫应答作用。目前，有关病毒感染与宿主自噬的相互作用的研究已成为自噬研究的一个重要方向。因此，研究PRV感染与细胞自噬的相互作用机制以及不同毒株之间的自噬差异，对理解PRV致病机理具有重要意义。
　　本文研究了PRV感染PK-15细胞和N2a细胞引起的自噬及其对病毒复制的影响，同时研究了传统毒株和变异毒株引起自噬的差异性，为PRV致病机理和不同毒株致病性差异的研究奠定了基础。本文具体内容如下:
　　1、猪伪狂犬病毒感染诱导PK-15细胞发生自噬
　　为研究伪狂犬病毒感染猪肾传代细胞系(PK-15)后对细胞自噬的影响，以及细胞自噬在PRV感染复制过程中的作用，本试验采用Western blot、透射电子显微镜(TEM)、激光共聚焦等方法研究了PK-15细胞感染PRV后的细胞自噬。利用自噬诱导剂雷帕霉素和自噬抑制剂3-MA以及沉默自噬相关基因Beclin-1等方法研究自噬对病毒复制的影响。结果表明，PRV感染PK-15细胞后，LC3-Ⅰ显著转化为LC3-Ⅱ，PK-15细胞内自噬小体的数量明显增加，此外，PRV感染增加了LC3阳性斑点的细胞数目，这些结果表明PRV感染能够诱导完整的自噬流反应。同时，上述研究方法也证实了PRV ZJ01变异毒株与PRV LA传统毒株诱导的自噬存在着差异。自噬的药理学变化试验以及siRNA干扰试验证实自噬能够促进PRV的复制。
　　2、猪伪狂犬病毒感染诱导小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2A发生自噬
　　自噬是存在于真核细胞中保守的分解代谢过程。该过程不仅可以维持细胞内环境稳定，而且可以清除入侵的病原体而实现细胞的自我保护与防御。本文旨在研究猪伪狂犬病毒感染小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2A(N2a)后对细胞自噬的影响，以及细胞自噬在PRV感染复制过程中的作用。本试验采用Western blot、透射电子显微镜(TEM)、激光共聚焦等方法研究了N2a细胞感染PRV后的细胞自噬:利用氯喹(CQ)研究PRV感染N2a细胞是否可以诱导完整的自噬流反应;紫外灭活、自噬调节剂以及siRNA干扰等方法研究自噬对病毒感染与复制的影响。结果表明，PRV感染N2a细胞后，LC3-Ⅰ显著转化为LC3-Ⅱ;透射电子显微镜显示PRV感染能明显增加N2a细胞的自噬体数量;经CQ预处理，PRV感染不断聚积LC3-Ⅱ，并且增加了LC3阳性斑点的细胞数目。这些结果表明PRV感染能够诱导完整的自噬流反应。上述研究方法也证实了变异毒株PRV ZJ01与传统毒株PRV LA所诱导的自噬存在着差异。自噬的药理学变化试验和siRNA干扰试验表明PRV可以通过Beclin-1-Atg7-Atg5经典途径诱导自噬并促进其自身的复制。