乙脑减毒疫苗与儿童重症肌无力发病相关分子病理机制研究

来源 :华中科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:phlok1985
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目的:既往研究报道疫苗免疫可能是诱发自身免疫病的原因,本研究旨在探索疫苗接种是否是中国儿童重症肌无力多发的原因,并通过动物实验探索其分子机制。  方法:对BALB/c小鼠4次免疫乙型脑炎减毒活疫苗,乙型脑炎灭活疫苗,乙型肝炎疫苗,百日咳、白喉、破伤风三联疫苗,麻疹、流行性腮腺炎、风疹三联疫苗、卡介苗和PBS缓冲液,然后用衣架悬挂实验和测力计观察实验小鼠疫苗接种后肌力,ELISA检测血清乙酰胆碱受体抗体,对小鼠坐骨神行肌电图重复电刺激,以及免疫荧光观察小鼠肌肉神经肌肉接头IgG和C3的沉积。然后用乙型脑炎减毒活疫苗全段蛋白序列与乙酰胆碱受体α亚基进行BLAST蛋白序列对比,寻找与乙酰胆碱受体存在相似蛋白序列的疫苗蛋白。重组表达乙型脑炎减毒活疫苗RdRp蛋白,用重组表达RdRp蛋白免疫BALB/c小鼠,然后用衣架悬挂实验和测力计观察实验小鼠疫苗接种后肌力,ELISA检测血清乙酰胆碱受体抗体,斑点印迹实验验证交叉免疫反应,T细胞增殖实验观察AChR能否诱导重组蛋白免疫老鼠脾脏T细胞增殖,并进行肌电图RNS检测以及免疫荧光法观察小鼠肌肉神经肌肉接头IgG和C3的沉积。  结果:乙型脑炎减毒活疫苗免疫小鼠可以诱导小鼠血清产生抗乙酰胆碱受体抗体,并出现小鼠上肢拉力减弱,小鼠衣架悬挂时间变短,部分小鼠肌电图RNS阳性,及小鼠神经肌肉接头IgG和C3的沉积。BLAST序列对比乙脑减毒疫苗RdRp蛋与AChR之间存在一个包含7个氨基酸的序列相识度达到86%。重组表达 RdRp蛋白免疫小鼠导致血清产生抗乙酰胆碱受体抗体,斑点印迹实验也证明RdRp免疫血清能与AChR蛋白反应,同时AChR刺激能诱导RdRp蛋白免疫老鼠脾脏T细胞增殖在细胞水平证明了交叉免疫反应的存在。另外,RdRp蛋白免疫小鼠也会出现上肢拉力减弱,小鼠衣架悬挂时间变短,部分RdRp免疫小鼠肌电图RNS在5Hz和20Hz都出现波峰下降,并能在小鼠神经肌肉接头发现IgG和C3的沉积  结论:乙型脑炎减毒活疫苗可以通过其与乙酰胆碱受体α亚基存在相似片段的RDRP蛋白诱导小鼠出现重症肌无力样表现,乙型脑炎减毒活疫苗接种可能是中国儿童重症肌无力多发的原因。
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