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本课题前期研究发现，GK与核孤儿受体Nur77存在蛋白质相互作用。近年研究表明，Nur77和GK与肝脏脂代谢过程存在密切联系，提示GK与Nur77可能通过蛋白质相互作用对肝脏脂代谢进行调控。本文对GK和Nur77相互作用进行深入研究，揭示其对肝脏脂代谢调控功能的影响，为脂代谢调控和代谢类疾病的发病机制和治疗提供线索；同时为后续动物实验建立基础，构建了GK-pCDH过表达慢病毒和GK-pSicoR干涉慢病毒载体，获得稳定过表达/干涉GK的慢病毒。本文首先利用免疫共沉淀技术，对GK与Nur77相互作用及作用域进行确认。进而利用Nur77对荧光素酶报告基因ApoA5promoter的转录激活作用，检测GK对Nur77的转录激活活性的影响。同时，选取几个受Nur77调控的脂代谢相关基因，在人肝细胞系L02及小鼠体内同时转染GK和Nur77的表达载体，进行实时定量PCR实验，检测各基因在肝中mRNA水平表达状况。此外，将GK的CDS序列构建到pCDH慢病毒质粒中，并将有效干涉GK的siRNA序列构建到pSicoR慢病毒质粒中，293T细胞包装获得慢病毒，检测慢病毒滴度，并对GK慢病毒过表达/干涉效果进行检测。由免疫共沉淀实验证实GK与Nur77存在相互作用，GK的N端和C端是相互作用的结构域。GK使Nur77报告基因转录活性降低，激活倍数可3倍降低至0.5倍，抑制效果明显，且不依赖于GK的激酶活性。Real-time PCR结果显示Nur77对Srebp-1c、Fas、Gpam和Acaca基因表达有抑制作用，经GK加入后可将表达由20%回转至90%。同时成功构建了GK过表达慢病毒载体GK-pCDH和GK干涉慢病毒载体GK-pSicoR，滴度分别达到7.8×10~6pfu/ml和2×10~7pfu/ml，GK蛋白过表达/干涉效果明显。上述研究揭示了GK与Nur77的相互作用及其对肝脏脂代谢调控功能的影响，构建了GK慢病毒为后续实验建立基础。