论文部分内容阅读
目的:卵巢恶性肿瘤是女性生殖道常见的恶性肿瘤之一,至今仍缺乏有效的早期诊断和治疗,免疫逃逸在恶性肿瘤的发生中起到重要的作用,基础研究表明,肿瘤细胞逃避免疫监视的机制之一是通过上调人类白细胞抗原G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)的表达。HLA-G是一种非经典的主要组织相容性复合体(Major Histocompatibility Complex,MHC)Ⅰ类分子,它诱导了母胎界面的免疫逃逸,且在生殖、肿瘤、器官移植、感染及自身免疫性疾病中都起着重要的免疫抑制作用。本研究通过免疫组织化学和RT-PCR法,检测卵巢恶性肿瘤组织中HLA-G在蛋白和mRNA水平上的表达情况,探讨其在卵巢恶性肿瘤发生、发展过程中的作用及临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法和逆转录酶聚合酶链式反应(reversetranscriptase-polymerase china reaction,RT-PCR)法分析新鲜卵巢良、恶性组织中HLA-G在蛋白和基因水平上的表达。(1)将经临床病理确诊的原发性卵巢恶性肿瘤组织45例,切片后应用抗HLA-G单克隆抗体4H84,按照免疫组织化学试剂盒(北京中杉金桥生物技术公司)中的步骤进行sp法染色,并以卵巢良性肿瘤组织36例作为对照,检测卵巢良、恶性组织中HLA-G蛋白的表达。(2)术中立即取材的新鲜卵巢肿瘤组织28例,其中恶性肿瘤15例,良性肿瘤13例,置于无菌冻存管于液氮冻存待检。将组织块研磨成组织匀浆,应用TRIZOL法提取组织总RNA,应用RT-PCR检测卵巢良、恶性组织中HLA-G mRNA的表达,以自愿行人工流产术的正常妊娠6～8周孕妇的绒毛组织8例作为阳性对照。结果:(1)以细胞膜和细胞浆内出现棕黄色颗粒或棕褐色颗粒为染色阳性细胞,根据肿瘤细胞染色的程度及染色细胞百分率进行综合评分,免疫组织化学显示,30例卵巢恶性肿瘤组织中HLA-G的表达阳性,阳性表达率为66.67%,相应的36例卵巢良性肿瘤中4例HLA-G表达阳性,阳性表达率为11.11%。卵巢恶性肿瘤组织中HLA-G阳性表达率显著高于卵巢良性肿瘤组织,差异有统计学意义(P＜0.01)。(2)卵巢浆液性囊腺癌、卵巢粘液性囊腺癌、子宫内膜样癌间HLA-G分子的阳性率差异有统计学意义(P＜0.05),HLA-G表达阳性率与年龄、临床分期、病理分级、淋巴结转移无关。(3)RT-PCR结果表明卵巢恶性肿瘤组织中有HLA-G mRNA的表达,而卵巢良性肿瘤及卵巢瘤样病变组织中则无HLA-G mRNA的表达。结论:卵巢恶性肿瘤组织中HLA-G mRNA及HLA-G蛋白表达异常,在卵巢恶性肿瘤的发生发展中免疫抑制起到重要作用。