CD44是介导细胞与细胞、细胞与细胞基质间相互作用的多功能I型跨膜蛋白，被鉴定为癌症干细胞的表面标记，在多种肿瘤的发生、发展和侵袭中发挥重要的作用，与肿瘤的不良预后有关。本研究采用新方法筛选与CD44存在相互作用的单链抗体，用于CD44的靶向治疗，即采用酵母双杂交技术从人单链抗体文库中钩选目的抗体。　　首先，将CD44胞外段基因插入pGBKT7质粒的EcoRI与BamHI位点之间，构建诱饵质粒pGBKT7-CD44，然后将诱饵质粒转化酵母AH109，进行毒性和自激活检测。再将人单链抗体cNDA文库转化已携带诱饵质粒的酵母AH109，使用营养缺陷型培养基进行筛选。将得到的36个候选阳性克隆进行两轮划线筛选(分别在SD/–Leu/–Trp/X-α-Gal和SD/–Ade/–His/–Leu/–Trp/X-α-Gal板上划线)及回复性转化实验，以排除假阳性克隆。经过回转实验后，得到20个阳性的scFv抗体克隆，分别进行测序分析其DNA顺序和抗体结构。通过哺乳动物双杂交实验鉴定阳性抗体蛋白与CD44的相互作用，最后确定单链抗体CA5与CD44存在相互作用。　　综上所述，本研究经过筛选和多重验证，通过酵母双杂交技术从单链抗体文库中筛选了与CD44存在相互作用的抗体蛋白，相信能为研究CD44的靶向治疗奠定基础。