背景阿司匹林,又名乙酰水杨酸,为解热镇痛药,其主要功能是消炎解痛和抗血栓。研究发现小剂量长期服用阿司匹林可以明显降低多种癌症的发病率。多次体外试验证明:阿司匹林可以抑制多种肿瘤细胞的生长,促进其凋亡。动物实验及流行病学研究也发现阿司匹林有一定的抗肿瘤作用。其作用机制目前尚未完全阐明。死亡受体5(death receptor5,DR5)是TNF相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)的受体,在一些细胞的凋亡中发挥作用,是一个重要的抗肿瘤靶点。食管癌是河南省常见的地方性肿瘤,其预防及治疗一直是肿瘤研究热点。本文从DR5方面对阿司匹林诱导人食道癌细胞凋亡活性及作用机制进行研究,以期为DR5配体及阿司匹林的抗肿瘤应用提供指导。目的观察阿司匹林对人食道癌EC9706细胞的凋亡诱导活性,并从DR5方面探讨阿司匹林诱导人食道癌细胞凋亡的作用机制。方法MTT法检测阿司匹林对食道癌细胞生长的抑制作用;免疫组化技术检测DR5的表达及分布的影响;通过观察细胞形态学变化、及琼脂糖凝胶电泳分析DNA降解检测阿司匹林对食道癌细胞的凋亡诱导作用。流式细胞仪检测人食道癌细胞膜DR5表达、细胞凋亡率、食道癌细胞线粒体膜电位以及钙离子的变化。Western blotting检测阿司匹林作用后食道癌细胞凋亡蛋白改变,即凋亡信号途径的caspase的激活。结果1. MTT法检测显示,不同浓度的阿司匹林作用食道癌EC9706细胞12小时对食管癌细胞具有生长抑制作用。而阿司匹林在同样浓度和作用时间下对食道上皮细胞NEC及DR5沉默的食管癌细胞生长的抑制作用则较弱。2.在倒置显微镜下所见,经阿司匹林作用12小时,EC9706细胞呈现细胞凋亡的形态特征,但是对食管上皮细胞NEC及DR5沉默的食管癌细胞影响较小。流式细胞术分析也显示,阿司匹林作用后食道癌EC9706细胞发生凋亡,并增强食管癌细胞对抗DR5功能性抗体诱导细胞凋亡的敏感性。3.免疫组化显示,阿司匹林作用后食道癌EC9706细胞内DR5表达增强,呈颗粒状,主要分布细胞质中;流式细胞术分析显示,阿司匹林作用后食道癌EC9706细胞膜DR5表达增强。4.流式细胞术分析显示,阿司匹林作用后食道癌EC9706细胞膜线粒体膜电位未发生改变,但是细胞内钙离子和ROS浓度增大。5. Western blotting结果显示,经阿司匹林作用,EC9706细胞内caspase-8、Caspase-3被激活,但不影响caspase-9。结论1.阿司匹林通过诱导细胞凋亡对食管鳞癌产生细胞毒作用;2.阿司匹林主要通过激活DR5诱导食管癌细胞凋亡。