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背景:在食管鳞状细胞癌的分子机制研究中发现,p53、p16、cyclinD1基因与食管癌的发生和预后有一定关系,但还难以揭示食管鳞状细胞癌的发病机制,这提示在食管癌的发生过程中可能存在其它基因的异常。通过比较基因组杂交技术发现,食管鳞癌细胞中存在3号染色体3p高频率缺失现象,表明该区域可能存在着肿瘤抑制基因(TSG),这些基因可能与食管鳞癌的发生存在着一定的相关关系。在其它肿瘤如肺癌、鼻咽癌等的研究中,也常见该区域缺失。BLU基因同样位于3p21.3,序列长约4.7kb,该基因在30%肺癌、42%乳腺癌、50%肾癌、86%成神经瘤和80%鼻咽癌细胞株中,启动子存在高度甲基化现象,并且甲基化程度与BLU基因的表达呈负相关,当用5-aza-2-deoxycytidine处理细胞后,可以增加其表达。BLU基因的启动子含有数个可与E2F1和HSF相结合的顺式作用元件,经热休克处理,可以增加BLU的表达,提示该基因是一个热应激基因,保护细胞免受外界应激的损伤。BLU基因在食管癌组织及细胞株中也出现了启动子的甲基化和缺失状况,其表达状况的变化对食管癌发生发展的研究还不明确。目的:构建BLU基因表达载体,观察BLU基因在食管癌细胞EC109中表达变化对食管癌细胞生长的影响,初步探讨BLU基因在食管癌的发生发展过程中的作用。方法:设计引物,用PCR法和MS-PCR法分别检测BLU基因在EC109细胞中的缺失情况和启动子甲基化情况。并用RT-PCR法观察BLU在EC109细胞中的表达情况。设计引物用PCR技术克隆野生型BLU基因,将野生型基因用工具酶连接到表达载体pSL6-IRES-EGFP上,然后使用感受态大肠杆菌XL-1进行扩增,提取质粒。用脂质体Lipfactime2000转染EC109细胞,观察绿色荧光表达量,并用RT-PCR和Western blot法检测BLU在EC109细胞中在RNA和蛋白质水平上的表达情况。应用CCK-8法和平板克隆形成实验,观察BLU基因对细胞增殖的影响。采用流式细胞术检测细胞周期,观察过量BLU对EC109细胞周期的影响。结果:用PCR法和MS-PCR法检测BLU基因在EC109细胞中存在缺失和启动子甲基化的情况,且表达下调。成功克隆出野生型BLU基因并构建出含有BLU基因的表达载体,经测序鉴定构建的表达载体中BLU基因无突变,用重组子转染293T细胞荧光显微镜下观察可见大量荧光表达。RT-PCR检测EC109细胞发现BLU基因存在缺失,并且其启动子区存在甲基化,BLU基因的表达降低。转染重组子入EC109细胞,荧光显微镜下观察可见大量绿色荧光,用RT-PCR法和Western blot法检测发现转染重组子的EC109细胞中BLU基因可在RNA水平和蛋白水平大量表达。PI染色,使用流式细胞仪检测转染重组子的EC109细胞和空质粒转染的EC109细胞的细胞周期未发现显著差异,细胞克隆形成实验结果表明实验组与对照组经统计学分析(卡方检验)P=0.896,无显著性差异。CCK-8检测实验组与对照组细胞增殖情况经统计学分析P=0.691,无统计学意义。结论: BLU基因的单独表达水平的改变对EC109细胞的增殖无显著性作用,它可能需要与其他基因联合作用才能对EC109细胞起到抑制作用,也可能对肿瘤细胞的侵袭和转移过程中发生作用,这还需要进一步的实验来验证。