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微小RNA(microRNA，miRNA)是一类广泛存在于动物和植物等多细胞生物中，长度约19～25个寡核苷酸的内源性非编码单链小RNA分子，通过与靶基因的mRNA分子部分或完全配对，引起mRNA降解或翻译抑制，从而在转录水平或转录后水平调节基因的表达。人类大约有50％的已注释miRNA位于和癌症相关的脆性位点及基因组区域中，miRNA的表达与多种癌症相关，可能在癌症中发挥着癌基因和抑癌基因的作用。目前，对miRNA与白血病的研究已成为国际上的研究热点之一，但对miRNA与儿童白血病尤其是急性非淋巴性白血病(acute non-lymphoblastic leukemia，ANLL)的研究较少报道，儿童ANLL的发病机制尚待阐明。
目的：初步探讨miRNA-100(miR-100)在儿童ANLL的发病机制中的调控作用。
方法：
1、采用实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative PolymeraseChain Reaction，Real-time PCR)检测miR-100在ANLL和对照儿童骨髓白细胞中的表达量，结合临床资料，采用SPSS16.0统计软件分析miR-100与儿童ANLL的各亚型、发病及治疗不同阶段中的表达规律。
2、运用生物信息学软件预测miR-100的靶基因，通过载体构建、细胞共转染、双荧光报告，体外验证其靶基因。
3、应用蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测ANLL和对照儿童骨髓白细胞中miR-100靶基因的蛋白表达，体内验证其靶基因。
结果：1、Real-time PCR结果显示：miR-100在儿童ANLL的M3亚型初发患者中显著地高表达，在治疗后未缓解及复发患者中仍有较高的表达，而在治疗后缓解的患者中却下降到接近正常水平。
2、双荧光报告结果显示：共转染293T或NB4细胞的miR-100对候选靶基因之一的CTDSPL3-UTR的荧光抑制率为50％左右，对其它候选基因的3UTR的荧光抑制率小于20％，对CTDSPL基因3-UTR种子区缺失突变体基本上无荧光抑制。
3、Westernblot结果显示：儿童ANLL的M3亚型初发患者中，CTDSPL的表达与miR-100的表达呈负相关。同一儿童ANLL的M3亚型患者，初发时CTDSPL蛋白的表达较低，治疗CR后CTDSPL蛋白表达明显升高。
结论：
1、miR-100在儿童ANLL的M3亚型初发患者中显著地高表达提示了miR-100在儿童ANLL的M3亚型的发病机制中起着类似癌基因的作用。
2、体内外验证了miR-100的靶基因是CTDSPL(抑癌基因)，推测其在儿童ANLL的M3亚型发病中的可能调节机制：高表达的miR-100通过抑制其靶基因CTDSPL的蛋白翻译，通过复杂的调控网络促进白血病肿瘤细胞的增殖，最终导致儿童ANLL的M3亚型的发生。