甲状腺激素受体(TRs)属于核受体超家族，由TRα和TRβ基因编码。他们分别编码两种主要亚型，而根据转录起始点以及剪切方式的不同，目前发现共有10种同工体(isoforms)。由TRα基因编码的有：TRα1、TRα2、TRα3、TR△α1、TR△α2：由TRβ基因编码的有：TRβ1、TRβ2、TRβ3、TR△β3以及本实验室发现的TRβ△。我们在大鼠肝脏中发现的这种新的甲状腺激素受体亚型，是目前已知的唯一的加长型TR亚型，加长部分位于外显子3和4之间，很可能在TRβ内含子3-4内存在一个新的外显子。 本研究旨在体外表达该新亚型的甲状腺激素受体，实现该受体蛋白在体外的高效表达，纯化后进行氨基酸组成分析以证明由mRNA推演的氨基酸序列的正确性，同时进行了TRβ△蛋白与激素T3的结合动力学分析及其与靶DNA结合的电泳迁移改变(EMSA)测定。首先从已经构建的pGEM-TEasy/TRβ△重组质粒中获得甲状腺激素受体β△全长cDNA编码序列，将目的基因cDNA插入融合型原核表达载体pETDuet-1，测序鉴定。然后重组表达质粒pETDuet-1/TRβ△转化E.coliBL21(DE3)，进行融合表达。通过SDS-PAGE电泳查看表达产物大小和表达量，Western-blotting进一步鉴定。表达条件优化后，TRβ△的表达量达到21.94mg/L。重组蛋白TRβ△占菌体蛋白的32.00％。通过透析袋电洗脱法快速纯化融合蛋白，获得电泳纯的蛋白质。水解蛋白质后，利用氨基酸自动分析仪进行蛋白质氨基酸组成的定量分析。重组蛋白是含有6×His纯化标签的，可以经过金属螯合亲和层析吸附于Ni-NTA树脂层析柱，冲洗去除非特异吸附的杂蛋白，将目的蛋白洗脱。最后，经放射性配体结合试验(RLBA)证实重组TRβ△可以与T3特异性结合。