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研究背景和目的:骨肉瘤是常见于儿童、青少年的来源于骨组织的一种恶性肿瘤,特征是恶性程度高、生长迅速、容易转移,目前骨肉瘤的治疗仍是一项重大挑战。USP10可以将细胞质中的蛋白质进行去泛素化,从而参与调节细胞生长、迁移和凋亡等,进而影响肿瘤细胞的发生发展。YAP1作为Hippo信号通路的重要下游效应器中YAP的亚型之一,在肿瘤细胞增殖、凋亡、自噬和远处转移中扮演着重要的角色。有研究发现USP10和YAP1均可参与调节肿瘤细胞的上皮间质转化和远处转移,进而影响肿瘤的发生发展。但两者在骨肉瘤中的作用及机制研究甚少。本研究主要探讨骨肉瘤中USP10、YAP1的表达及其相关性,并研究骨肉瘤中USP10对上皮-间质转化和肿瘤转移的影响,目的是为骨肉瘤患者的临床靶向治疗提供新的理论和依据。方法:1、通过免疫组化、实时荧光定量及蛋白印迹法分析USP10在骨肉瘤组织中的表达水平,通过实时荧光定量及蛋白印迹法检测正常成骨细胞及骨肉瘤细胞系中USP10表达水平。2、将构建好的shUSP10质粒感染骨肉瘤细胞系中USP10高表达的细胞系,筛选出下调shUSP10水平最明显的质粒进行实验。通过蛋白印迹法观察经过shUSP10质粒感染骨肉瘤细胞系后的上皮-间质转化（EMT）相关蛋白表达水平的变化,然后通过划痕愈合实验、Transwell实验方法观察并分析细胞侵袭、迁移能力的变化。并且,通过尾静脉注射稳定转染sh NC/143B、shUSP10/143B的骨肉瘤细胞株,观察裸鼠骨肉瘤肺转移的发生。3、通过免疫组化、实时荧光定量及蛋白印迹法分析骨肉瘤组织及癌旁组织中YAP1的表达水平,并分析骨肉瘤组织中USP10与YAP1的相关性。通过改变骨肉瘤细胞中USP10表达后,进一步分析YAP1的表达。然后在shUSP10骨肉瘤细胞系中上调YAP1及过表达USP10细胞系中抑制YAP1的表达,通过Western blot实验方法分析EMT相关的蛋白表达情况及Transwell实验观察细胞侵袭及迁移能力。最后,通过Co-IP方法检测骨肉瘤细胞系中USP10是否能直接与YAP1相互结合,4、在使用蛋白酶体抑制剂（MG132）作用下,通过Western blot检测USP10对YAP1表达水平的影响。结果:1、骨肉瘤及其邻近组织的免疫组化分析显示:USP10在72.41%（21/29）的骨肉瘤组织中高表达,但在癌旁组织中仅检出升高为17.24%（5/29）（p＜0.01）。q RT-PCR、Western blot检测证实USP10在骨肉瘤高表达（p＜0.01）。在正常成骨细胞与骨肉瘤细胞系中通过q RT-PCR、Western blot实验方法检测发现U2-OS、143b、MG63、Saos-2细胞系中USP10表达均较正常成骨细胞明显升高（p＜0.01）,且U2-OS及143B最为明显。2、体外实验通过shUSP10质粒转染U2-OS、143B细胞系后,q RT-PCR、Western blot实验检测证明EMT的相关蛋白发生了改变,其中E-Cadherin蛋白表达水平明显升高（p＜0.05）,而N-Cadherin蛋白及Vimentin蛋白表达水平则明显下降（p＜0.05）;再通过肿瘤细胞划痕愈合实验及Transwell实验证实了骨肉瘤细胞迁移、侵袭能力受到了明显的抑制（p＜0.01）。体内成瘤实验同样表明了骨肉瘤细胞下调USP10后经尾静脉注射,肺转移的发生数相对于对照组明显减少（p＜0.05）。以上结果证实了shUSP10可抑制骨肉瘤细胞发生EMT和远处转移。3、通过Western blot实验方法分析下调骨肉瘤细胞中USP10的蛋白表达后,发现YAP1的表达同样发生下降;相反,当给予过表达USP10后发现YAP1显著升高。我们通过将骨肉瘤组织与癌旁组织进行免疫组化分析发现YAP1表达水平显著高于癌旁组织,且YAP1表达USP10的表达呈正相关。同时,此研究还发现在shUSP10细胞株中经过上调YAP1的表达后可以挽救骨肉瘤的EMT,同时骨肉瘤的侵袭、转移能力增强;反过来,在骨肉瘤中过表达USP10后下调YAP1的表达则可以抑制骨肉瘤的EMT,骨肉瘤的侵袭、转移能力也下降。我们通过Co-IP证实了USP10与YAP1能直接结合相互产生作用。4、我们还证实了在骨肉瘤细胞中,YAP1的表达随着使用蛋白酶体抑制剂MG132的作用时间延长而增加。在改变肿瘤细胞中USP10的表达后,使用MG132处理后可发现YAP1的表达与对照组对比并未发生明显的变化,并且在骨肉瘤细胞中YAP1蛋白降解速率明显下降。最后,我们的研究证实USP10能够通过去泛素化稳定YAP1的表达促进骨肉瘤上皮间质转化和转移。结论:我们通过体内和体外实验观察到USP10可以通过稳定YAP1的表达促进骨肉瘤EMT以及远处转移。我们的研究成果为骨肉瘤的EMT和转移提供了新的理论基础,并为骨肉瘤的临床靶向治疗提供新的靶点。