目的:通过研究辛伐他汀(Simvastatin)对人结肠癌细胞SW480的体外作用,观察辛伐他汀联合抗癌药物奥沙利铂(Oxaliplation)对SW480细胞体外作用的影响,进一步阐明辛伐他汀抑制肿瘤细胞增殖及诱导凋亡的可能机制,并探讨其用于结肠癌治疗及化学预防的可行性。方法:1体外培养人结肠癌细胞SW480,采用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay, MTT)比色法检测辛伐他汀对该细胞增殖的影响;流式细胞仪测定辛伐他汀对SW480细胞周期分布和凋亡的影响;光学显微镜及透射电镜观察细胞形态学改变;采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)半定量检测辛伐他汀处理细胞48h后bcl-2、cyclind1蛋白的表达水平。2采用MTT比色法检测辛伐他汀与抗癌药物奥沙利铂联合应用对人结肠癌细胞SW480的增殖抑制作用,采用金氏公式[1]分析相互作用指数(Iteraction Index),评价联合后的作用,如q>0.85表示相加作用,q<0.85为拮抗作用;流式细胞仪检测辛伐他汀联合不同浓度奥沙利铂对细胞凋亡的影响。结果:1 MTT比色法显示辛伐他汀(2、5、10、20μmol/L)对SW480细胞增殖具有抑制作用。不同浓度辛伐他汀处理细胞24~72h后,与对照组相比,各处理组OD值均有不同程度下降,差异具有极显著性(P<0.01)。各实验组间比较,差异亦具有极显著性(P<0.01)。且随辛伐他汀处理浓度的增大、作用时间的延长,OD值逐渐下降,即辛伐他汀对SW480细胞的增殖抑制作用呈明显的时间-剂量依赖效应。流式细胞仪检测细胞周期分布显示,0、2、5、10、20μmol/L辛伐他汀作用SW480细胞48h后,随药物浓度增大,G0/G1期细胞逐渐增多,S期细胞逐渐减少,G2/M期细胞变化不明显。即辛伐他汀可阻滞SW480细胞周期进程于G0/G1期,该作用呈剂量-效应依赖关系。0、5、10、20μmol/L辛伐他汀处理细胞48h后,流式细胞仪可测得典型的亚二倍体凋亡峰,依辛伐他汀浓度增大而逐渐升高,凋亡百分率分别为:1.97%、11.71%、26.66%、34.07%。光镜下观察细胞形态结果显示:未经药物作用的细胞呈菱形或梭形,形态饱满,而用药组细胞皱缩,破裂,呈不规则形,有的细胞两端出现细长的伪足,细胞胞浆中出现空泡,脱落细胞增多。透射电镜下观察细胞超微结构发生改变,细胞体积缩小,胞质浓缩,胞核向外呈锐角突起,染色质高度浓缩,电子密度增高,边集于核膜下或呈新月状,有的出现核固缩。流式细胞仪间接分析细胞bcl-2、cyclind1蛋白表达显示,0、5、10、20μmol/L辛伐他汀处理SW480细胞48h后,bcl-2、cyclind1的荧光指数FI值随处理浓度增大而逐渐减小。对于每一种蛋白,比较其处理组和对照组的FI值,差异均具有显著性(P<0.05)。2 MTT比色法分析辛伐他汀联合奥沙利铂对SW480细胞的增殖抑制作用,结果显示:2、5、10μmol/L的辛伐他汀可加强奥沙利铂对SW480细胞的增殖抑制作用。且随辛伐他汀浓度的增大,其对奥沙利铂的协同作用增强。金氏公式分析相互作用指数显示,不同浓度奥沙利铂联合2、5、10μmol/L的辛伐他汀的q值均大于0.85。流式细胞仪检测细胞凋亡率结果显示,2μmol/L辛伐他汀与不同浓度奥沙利铂联合作用细胞48h后,细胞凋亡百分率随奥沙利铂浓度增高而增大,与对照组比较差异具有显著性(P<0.05),且与单用奥沙利铂组比较差异具有显著性(P<0.05)。结论:1 HMG-CoA还原酶抑制剂辛伐他汀具有抑制结肠癌细胞SW480增殖及诱导其凋亡的作用,为临床结肠癌的治疗和化学预防提供了新的思路和理论依据。2辛伐他汀抑制结肠癌细胞SW480增殖的作用呈时间-剂量依赖关系。3辛伐他汀阻滞结肠癌细胞SW480于G0/G1期并可诱导该细胞凋亡。4辛伐他汀可通过下调bcl-2、cyclind1蛋白的表达而发挥其抑制结肠癌细胞SW480增殖、诱导该细胞凋亡的作用。5辛伐他汀可协同奥沙利铂对SW480细胞的增殖抑制作用。6辛伐他汀可强化奥沙利铂诱导SW480细胞凋亡的作用,推测辛伐他汀可增加SW480细胞对化疗药的敏感性。