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背景:近年来研究发现一种肿瘤微环境新成员,肿瘤细胞来源的外泌体(exosome,EXO),即肿瘤细胞分泌的包裹有多种生物活性成分(脂质、蛋白质、DNA、mRNA以及microRNAs等)并有脂质膜包被的纳米级异质性囊泡,大量研究显示外泌体是细胞间相互作用以及信息交流的一种重要方式,与肿瘤的发生发展密不可分。一旦外泌体的生物学特质被全面系统地阐述和掌握,它便会具有巨大的应用和治疗潜能。方法:我们采用超速离心或提取试剂从细胞培养液中提取分离外泌体,采用透射电镜及Western blot技术进行鉴定。利用新一代的测序技术对外泌体中small RNA进行检测分析,得到基本表达分布谱,比较来源于胃癌细胞和正常粘膜细胞的外泌体中microRNA的差异,并以qPCR方法验证,以及比较来源自肿瘤相关成纤维细胞和正常成纤维细胞外泌体中microRNA的差异。通过对HUVEC进行细胞增殖实验、划痕实验、transwell小室迁移实验、小管形成实验及肿瘤细胞血管拟态实验等,观察肿瘤来源外泌体的刺激能否影响内皮细胞的活化。结果:在本研究中,我们成功地从细胞培养液中提取出完整的胃癌细胞及成纤维细胞的外泌体,完整的外泌体在电镜下呈40-100nm大小的小泡样结构,表面有标志性分子CD63和CD9的表达。新一代的测序技术对外泌体中的small RNA进行测序,得到了外泌体中small RNA的表达谱信息,其中microRNA所占的比例较大,进一步的已知microRNA和差异microRNA的分析表明外泌体中microRNA分布具有集中性,其中has-mir-21含量最多,miR-148a-3p在肿瘤细胞外泌体中较正常粘膜对照表达上调,hsa-miR-146a-5p在肿瘤相关成纤维细胞外泌体中较正常对照表达上调。此外,胃癌细胞来源的外泌体刺激血管内皮细胞,能够促进内皮细胞的增值、迁移、小管形成等能力,促进肿瘤细胞血管拟态形成,并且其作用当阻断外泌体分泌时可以受到抑制,当加入外源外泌体时可以得到恢复。结论:1.展示了外泌体中small RNA的表达谱情况,差异microRNA分析为挑选外泌体中胃癌标志性microRNA提供依据。2.胃癌细胞分泌的外泌体能够促进内皮细胞的活化,和肿瘤血管形成密切相关。