发菜多糖的分离纯化及结构研究

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本文对自养发菜多糖进行了分离纯化,比较了四种不同树脂分离纯化发菜多糖效果。并进一步研究了不同型式和洗脱剂对纯化效果的影响;纯化后的多糖经酶解、高碘酸氧化、刚果红实验、元素分析以及原子力显微镜等研究分析多糖的结构。主要研究结果如下:(1)在同样洗脱条件下,DEAE-Cellulose树脂的洗脱曲线,洗脱体积最小,峰宽最窄,而且对称因子最接近于1,峰最高值也接近最大。粗多糖经DEAE-Cellulose纯化后,多糖的含量由原来的31.9%提高到80.0%。蛋白含量从原来的14.551μg/mL降低到1.938μg/mL。综合各参数比较,DEAE-Cellulose纯化发菜多糖的效果最好。(2)采用OH-型离子交换树脂较C1-型对发菜多糖有更好的分离纯化效果;NaCl作为洗脱剂洗脱效果最好,通过不同浓度的NaCl等度洗脱实验,发现洗脱最佳浓度为0.2mol/L,这为发菜多糖离子交换色谱纯化工艺的进一步扩大提供了基础数据。(3)离子交换层析,上样量100mg,上样体积100mL,洗脱流速1.0mL/min,0.2mol/L的氯化钠溶液等度洗脱。经过离子交换层析得到的自养发菜多糖经鉴定纯度均一。(4)发菜多糖具有有序的三螺旋结构,含有β-(1→4)糖苷键。用原子力显微镜(AFM)对发菜多糖的微观结构进行观察,多糖分子聚集紧密成团,形成厚度约1.0-15.0nm,直径为50-200nm的球面。本文初步确定了纯化发菜多糖的工艺,为细胞培养发菜多糖工业化提取和分离提供了理论依据。同时对发菜多糖的一级结构进行研究,为研究多糖的高级结构及结构一效应关系奠定基础。
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