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为了探索对于猪早期胚胎在不同分裂时期毒性最低,冷冻效果最优的冷冻保护液配方,寻找最适合猪不同分裂时期胚胎的冷冻方法,探索玻璃化冷冻保存对猪不同分裂时期胚胎发育能力的影响,从而为成功冷冻猪早期胚胎能应用于生产实际提供理论支持。因此本研究以三种不同分裂时期的胚胎细胞作为试验材料,使用玻璃化冷冻方法,筛选三组不同的冷冻保护液,比较三种不同冷冻载体冷冻胚胎的效果差异,同时选用孤雌激活与体外授精两种方法对比胚胎冷冻-复苏后的发育潜能。结果发现:1.三组冷冻保护液对不同分裂时期的胚胎细胞均有低毒性作用,各组存活率、分裂率、囊胚率均低于对照组。单独使用乙二醇,或者乙二醇混合二甲基亚飒使用,都是适合胚胎细胞玻璃化冷冻的保护剂配方。综合三种冷冻保护液对胚胎各个时期冷冻效果考虑,最佳冷冻保护液为第二组HM+7.5%(DMSO+EG),HM+17%(DMSO+EG)+0.4MSu,最佳冷冻时期为胚胎2细胞时期。2.应用选出的不同分裂时期的胚胎细胞最适冷冻保护液,分别采用GMP、OPS、半麦管三种载体比较其对胚胎冷冻的影响,发现在2细胞时期使用OPS法,形态正常率显著高于半麦管以及GMP管(81.57%VS 58.96%VS 54.26%,P<0.05),但半麦管法分裂率最高,三种方法囊胚率差异不显著,但半麦管法囊胚率以及囊胚细胞数量为最高;在4细胞时期使用OPS法,形态正常率显著高于另半麦管以及GMP管(76.73%VS 34.24%VS 43.32%,P<0.05),三种载体分裂率无明显差异但半麦管法略优于其他两种载体,囊胚率半麦管高于OPS管和GMP管(3.25%VS 0.49%VS0,P<0.05);在8细胞时期使用OPS法,形态正常率显著高于另半麦管以及GMP管(56.68%VS 26.58%VS 36.22%,P<0.05),三种载体分裂率无明显差异,囊胚率半麦管高于OPS管和GMP管(1.96%VS00VS0,P<0.05)。综合上述结论,半麦管法更适合应用于胚胎玻璃化冷冻。3.玻璃化冷冻保存前使用CB液孵育处理不同分裂时期的胚胎细胞,发现在胚胎2细胞时CB液孵育处理与常规玻璃化冷冻两种处理方法得到的存活率、分裂率无统计学差异,CB处理法囊胚率高于常规冷冻法(67.63%VS54.14%,P<0.05);在胚胎4细胞时CB处理法存活率高于常规冷冻法(52.47%VS37.88%,P<0.05),分裂率与囊胚率差异不显著,但CB处理法都略高于常规冷冻法;在胚胎8细胞时两种处理方法在存活率、分裂率与囊胚率上均无统计学差异。结果表明CB处理法要优于常规冷冻法。4.应用孤雌激活与体外授精(IVF)两种方法,对比冷冻-复苏后不同分裂时期的胚胎细胞的发育能力。发现在胚胎2细胞时期,IVF与孤雌激活法在存活率、分裂率与囊胚率上均无显著差异,但体外授精胚胎略优于孤雌激活胚胎;在胚胎4细胞时期,IVF法在存活率上显著高于孤雌激活法(76.48%VS52.47%,P<0.05),在分裂率与囊胚率上无统计学差异;在胚胎8细胞时期,IVF法在存活率与分裂率上显著高于孤雌激活法(49.55%VS18.96%,P<0.05),在囊胚率上IVF与孤雌激活两种方法无统计学差异。结果表明IVF法处理得到的胚胎细胞冷冻保存复苏后早期胚胎发育率优于孤雌激活法。