流感的流行给人类健康带来很大的危害,家禽市场一直被认为是流感病毒潜在的“温床”,众多亚型病毒均可被检测到。这就为不同亚型病毒间的重组提供了机会。在中国家禽市场已经是人感染H5N1高致病性禽流感的重要来源之一,对于很多病例而言,访问活禽市场是唯一发现的危险因素。可见对家禽市场进行流感监测,不仅可以了解流感病毒流行病学状况,而且具有重要的公共卫生意义。　　 从2009年到2010年,从华中地区家禽市场中共分离到3株H6N6亚型禽流感病毒。系统进化分析表明本研究中所分离到的3株H6N6亚型病毒是由H6亚类病毒不同组之间的病毒经基因重排产生的。动物感染实验表明本研究中所分离到的H6N6亚型禽流感病毒对鸡是非致病性的,对小鼠是低致病性的。野生型病毒分离株可不经过适应在小鼠肺内进行复制,经鼠肺传代适应后,该毒株对小鼠的致病性上升很快,随着病毒在鼠肺中传代,毒力不断增加,并导致小鼠死亡。对P0,P4,P8代的病毒进行了全基因组测序,发现在鼠肺传代过程中,病毒基因组内有多个位点的氨基酸发生了替换和病毒致病力密切相关。　　 在2009-2010年,对华中地区家禽市场进行常规流感监测,总共分离到48株H5N1亚型禽流感病毒,其中鸡30株,鸭17株,鸽子1株。并对其中代表性的27株病毒进行了全基因组测序,进行了系统进化分析。结果表明,本实验的27株病毒HA基因在进化树上属于Clade2.3.2和Clade2.3.4两个分支,NA基因同HA基因相似,也属于两个分支。但其内部基因进化比较复杂,呈现不同的进化特征。对这27株病毒基因型分析表明,他们属于3个不同的基因型,即V,V4,V5。其中V4,V5基因型是最新出现的,表明H5N1病毒在家禽中持续的进化。　　 另外流感病毒抗原变异不断发生,诱导型特异性抗体的疫苗往往不能及时适应这些变化,对人们健康造成不利影响。2009年的甲流(H1N1)再次为人类敲响了警钟。这就使得开发针对病毒保守蛋白或保守区域的疫苗显得尤为重要。流感M2蛋白的胞外区(M2e)在所有A型流感病毒中十分保守,一直受到人们广泛关注。在本论文中,我们研究了流感病毒M2e疫苗的免疫保护能力和防护机制,优化了M2e DNA疫苗。人工合成密码子优化的含3个拷贝的M2e序列的基因(p3M2e),将p3M2e和人组织纤维蛋白溶酶原(Tpa)分泌信号序列融合构建DNA疫苗p-Tpa-p3M2e,也构建了不含Tpa的DNA疫苗p-p3M2e。此外也构建了单拷贝的p-Tpa-M2e,p-M2e作为对照。在小鼠上进行了动物实验,结果显示,p-Tpa-p3M2e,p-p3M2e均诱导了较高的M2e特异性抗体,p-Tpa-p3M2e效果更佳,而p-Tpa-M2e,p-M2e未能检测到抗体。攻毒实验显示,p-Tpa-p3M2e免疫对同源病毒攻毒达到了完全保护,降低了肺部病毒量,减少了体重丢失;并对异源病毒攻毒也有较好的保护效果,对。H9N2,H6N6,H10N8病毒攻毒保护率分别为80%,40%和20%。在被动免疫实验中,p-Tpa-p3M2e DNA诱导的M2e特异性抗体可以提供对同源病毒攻毒的完全保护。以上结果表明,优化的M2eDNA疫苗是不错的候选流感通用疫苗,为流感通用疫苗发展提供了一个新思路。