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CYP3A4是人类最重要的Ⅰ相药物代谢酶，约占成人肝脏中药物代谢酶的60％，参与半数以上临床用药的体内代谢过程，且CYP3A4的酶活性决定其靶药物的体内代谢速率。CYP3A4的表达受到环境和遗传因素的共同影响，但CYP3A4酶活性个体差异的90％来源于遗传因素，现有基因变异的研究结果不能充分解释CYP3A4的个体化差异。miRNA作为基因转录后的重要调控因子，有研究从细胞水平证实了miRNA-27b能直接作用于CYP3A4的3-UTR，下调CYP3A4的表达，但关于miRNA-27b是否在人类肝脏中调控CYP3A4的表达未做出确切解答，其他的miRNA在CYP3A4表达调控中的作用还知之甚少。 研究目的 筛查可能调控CYP3A4基因表达的miRNA，及其在人类肝脏组织中对CYP3A4的mRNA、蛋白水平和酶活性的影响;探讨miRNA-27b是否在人类肝脏组织中调控CYP3A4表达水平。 方法和结果 (1)采用三种软件预测可能作用于CYP3A4基因3-UTR的miRNA，共预测出108种miRNA。 (2)通过高通量转染实验和荧光色素酶报告实验从108种miRNA中筛选出阳性miRNA12种。并从中选择了miRNA-660做进一步的功能验证，miRNA-660可明显抑制萤光素酶活性，使其降低35％。 (3)收集到28例人类肝脏组织，通过LNA标记的miRNA特异引物及SYBRGreen实时荧光定量PCR，检测miRNA-660和miRNA-27b在肝脏组织中的表达量，结果显示两种miRNA的表达水平在28个样本中存在明显差异。 (4)SYBR Green实时荧光定量PCR检测肝脏组织中CYP3A4的mRNA量，western blot检测CYP3A4蛋白量，HPLC检测CYP3A4酶活性，将三种表达水平与miRNA-660、miR-27b的表达值进行相关性分析，结果显示miRNA-660与肝脏组织中CYP3A4的蛋白、酶活性显著负相关(p＜0.05)，与mRNA无显著相关性(p＞0.05);miRNA-27b与肝脏组织中CYP3A4的mRNA、蛋白水平、酶活性均无显著相关性(p＞0.05)。 结论 (1) miRNA-660可能参与了人类肝脏组织中CYP3A4基因的表达调控，机制可能与抑制CYP3A4基因mRNA的翻译有关; (2) miRNA-27b和人肝脏组织CYP3A4的表达水平没有明显相关性。