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近年来随着免疫抑制剂的大量使用,创伤性操作的广泛应用,以及广谱抗菌药物的不合理应用,临床上包括肠球菌在内的G+球菌引起的感染日益加重,肠球菌已成为院内感染的重要致病菌,肠球菌的耐药问题也越来越引起人们的关注。特别是耐高浓度氨基苷类(High-level Aminoglycosices Resistant,HLAR)肠球菌的出现,进一步使肠球菌所致的严重感染成为临床上的棘手问题。氨基糖苷类药物与作用于细胞壁药物的联合应用是治疗肠球菌感染的重要手段,而肠球菌一旦对氨基糖苷类高水平耐药,则协同作用消失,给临床治疗带来了很大的困难。肠球菌对氨基糖苷类不仅天然中度耐药,而且对氨基糖苷类的高水平耐药性还能特异性地传递,氨基糖苷类修饰酶在高水平耐药性的传递中起着关键性作用。本研究就肠球菌对临床常用抗生素的耐药性进行了检测,探讨了肠球菌耐高水平氨基糖苷类药物的分子生物学机制,并对庆大霉素高水平耐药肠球菌进行分子流行病学研究,指导临床合理选用抗生素,避免耐药菌株的传播。第一部分肠球菌耐药性检测目的了解肠球菌对常用抗菌药物的耐药情况,指导临床合理用药。方法对临床各类感染标本分离出的70株肠球菌,使用琼脂稀释法进行药敏试验并对结果进行分析。结果70株肠球菌中粪肠球菌51株、屎肠球菌19株;标本来源依次为尿液47.1%、外科分泌物21.4%、痰15.7%,70株肠球菌对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺的耐药率为0;对磷霉素的耐药率较低,为30.0%;HLGR的检出率为67.1%,HLSR的检出率为40.0%;而对其它临床常用抗菌药物耐药率均超过50%。结论肠球菌在尿液中最易检出,且多重耐药显著,对高浓度庆大霉素和高浓度链霉素耐药率高,而对糖肽类和利奈唑胺十分敏感。第二部分肠球菌氨基糖苷类高水平耐药基因的检测目的了解肠球菌氨基糖苷类高水平耐药基因的流行情况。方法PCR法扩增氨基糖苷类高水平耐药肠球菌的3种高耐药基因:aac(6′)/aph (2″)、aph(3′)-Ⅲ和ant(6′)-Ⅰ,并通过PCR产物的基因测序验证结果的可靠性。结果60%的氨基糖苷类高耐肠球菌(HLAR)检测到aph(3′)-Ⅲ,85%以上庆大霉素高耐肠球菌(HLGR)检测到aac(6′)/aph (2″),68%以上链霉素高耐肠球菌(HLSR)检测到ant(6′)-Ⅰ。其中有15株(27.3%)耐药菌3种耐药基因均呈阳性,15株(27.3%)耐药菌2种耐药基因呈阳性,即有50%以上的肠球菌含2种以上的耐药基因。结论国内肠球菌产氨基糖苷类修饰酶的种类较多,双功能酶AAC(6′)/APH(2″)、磷酸转移酶APH(3′)-Ⅲ、核苷转移酶ANT(6′)-Ⅰ介导了大多数肠球菌对氨基糖苷类的高水平耐药。第三部分庆大霉素高水平耐药肠球菌分子流行病学研究目的应用ERIC-PCR技术对庆大霉素高水平耐药肠球菌进行分子流行病学研究。方法以ERIC序列为引物结合位点,PCR扩增47株庆大霉素高水平耐药肠球菌基因组。结果31株粪肠球菌分为5型,其中A型12株,占38.7%;B型10株,占32.3%;C型6株,占19.4%。16株屎肠球也分为5型(图8),其中A型6株,占37.5%;B型4株,占25.0%。来源于同所医院的菌株同源性较高。结论肠球菌对庆大霉素的高水平耐药可能存在菌株间的克隆传播。