配子体无融合生殖避开了减数分裂和受精作用，产生具有母本基因型的克隆后代，在种子生产和杂种优势利用上有诱人的应用前景。龙须草(Eulaliopsis binata)为禾本科一种新型无融合生殖材料，为配子体无孢子生殖，且存在胚乳自主发生类型，即极核或次生核可不经受精而形成四倍体的胚乳。鉴于农作物如水稻、小麦等的食用部分主要为胚乳，且产量和品质与胚乳直接相关，那么对胚乳自主发生的无融合生殖材料的研究就显得很有意义。 我们根据拟南芥，水稻，玉米等物种的FIE序列的保守区域设计简并引物，以广东星子居群红杆型龙须草的花序为材料，抽提RNA，用RT-PCR的方法扩增到800bp左右的片断，将其克隆到pGEM-T载体上并测序。同时我们以水稻FIE的cDNA克隆制备cRNA探针，通过原位杂交的方法研究FIE基因在无融合生殖龙须草中的时空表达。 主要研究结果： 1.测序结果表明该片断长为826bp，编码275个氨基酸，暂命名为EbFIE1。EbFIE1与已报道的玉米，高粱和水稻等物种FIE基因具有很高的相似性，为龙须草FIE基因特异片断。在此基础上我们可以获得全长cDNA，从而能进一步研究野生型FIE基因和突变.fie基因的同源性及其功能。 2. EbFIE1与玉米FIE1、玉米FIE2、水稻FIE和小麦FIE核苷酸同源性分别为95％、83％、87％、84％，与玉米FIEl、FIE2、水稻FIE、高粱FIE、拟南芥FIE、梓树FIE和桉树FIE氨基酸同源性分别为95％、76％、88％、94％、72％、80％和84％。 3.我们以水稻FIE的cDNA克隆制备cRNA探针作原位杂交，发现龙须草中FIE基因的表达确实存在时空的特异性。FIE仅在雌配子体和雄配子体中表达，而在花的其他部位无杂交信号。孢母细胞形成至单核小孢子时期，FIE主要在雄蕊小孢子中表达，雌蕊中仅大孢子母细胞(无孢子生殖起始细胞)显示有杂交信号：胚囊发育时期，雌配子体细胞有FIE表达，此时小孢子信号减弱；成熟胚有很强的杂交信号，胚乳中则没有。败育子房和花药中完全没有FIE表达。这就说明FIE在雄配子体中的表达逐渐减弱，而在雌配子体中的表达逐渐增强，在种子形成中控制和调节胚乳与胚的发育。 结论：本研究以胚乳自主发生型的无融合生殖龙须草为材料，采用同源序列法，通过RT-PCR克隆了无融合生殖胚乳自主发生相关基因FIE的部分cDNA同源序列，并做了详细的比对分析。此特异片断为FIE全长的获得和龙须草胚乳自主发育分子机理的研究奠定了基础。原位杂交的结果表明FIE在龙须草生殖发育的过程中特异的时空表达，与雌雄配子体发育有关，并参与调节胚和胚乳的发育。