巴马香猪鼻咽相关淋巴组织的研究

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鼻腔免疫在预防呼吸道传染病中发挥重要的作用。随着猪呼吸道传染病的不断增加,有关猪鼻腔免疫的研究已广泛开展,但猪的鼻腔结构研究较少。尽管小鼠、大鼠和兔的鼻腔结构已得到深入研究,但是这些动物鼻腔的解剖和组织学结构与猪差别很大。而猪的鼻腔结构与人类相似,研究猪的鼻腔结构还会为人鼻腔免疫提供理论基础。巴马香猪是一种微型品种猪,便于鼻腔结构的研究。本研究采集巴马香猪的鼻腔,利用组织学和免疫组织化学的方法显示鼻腔结构的特征。结果显示,巴马香猪鼻腔从前至后可分为前庭部、呼吸部和嗅部。前庭部主要由复层扁平上皮覆盖;呼吸部主要由呼吸上皮覆盖;嗅部主要由嗅上皮覆盖。固有层散布淋巴组织,鼻咽相关淋巴组织(nasopharynx-associated lymphoid tissues,NALTs)主要分布在鼻腔后部鼻咽顶壁,并向后与咽扁桃体相连。CD3+ T细胞、IgA分泌细胞、M细胞和树突状细胞(dendritic cells,DCs)主要分布在鼻腔后部,上皮中的杯状细胞主要分布在呼吸部。通过我们对巴马香猪鼻腔的研究,以期为猪和人类鼻腔免疫机制的研究提供理论依据。本研究内容分为以下三个部分:1、巴马香猪的鼻腔结构本试验选择4只2.5月龄健康巴马香猪,采集鼻腔从前至后(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ)五个与正中矢状面垂直的横截面组织样品。在实体显微镜下观察鼻腔的解剖结构。将组织样品固定、脱钙、石蜡包埋处理,制作切片;利用HE染色的方法观察鼻腔的结构特点。结果显示,根据巴马香猪鼻腔的结构特点,可将其分为前庭区、呼吸区和嗅区,分别覆盖着复层扁平上皮、呼吸上皮和嗅上皮。鼻腔固有层分布有丰富的血管和腺体,淋巴组织随机分布在鼻腔各部,鼻腔后部聚集着大量的NALTs,并向后延伸连接咽扁桃体。2、巴马香猪鼻腔免疫活性细胞的分布本试验旨在了解巴马香猪鼻腔CD3+T细胞、IgA分泌细胞、上皮内杯状细胞和M细胞的分布情况。利用过碘酸希夫染色法显示杯状细胞,利用免疫组化的方法显示CD3+T细胞、IgA分泌细胞和M细胞,显微镜下观察这些免疫活性细胞的形态和分布。结果显示,CD3+T细胞最多分布在鼻腔Ⅴ,其数量显著多于鼻腔Ⅳ(P<0.05);鼻腔Ⅳ的CD3+ T细胞比鼻腔Ⅱ和Ⅲ多(P<0.05);CD3+ T细胞在鼻腔Ⅰ分布最少(P<0.05)。鼻腔Ⅴ的IgA分泌细胞数量显著多于鼻腔Ⅲ(P<0.05);鼻腔Ⅲ的IgA分泌细胞数量显著多于Ⅰ和Ⅱ(P<0.05)。M细胞在鼻腔Ⅴ的显著数量多于鼻腔Ⅲ和Ⅳ(P<0.05);鼻腔Ⅲ和Ⅳ的M细胞数量明显多于鼻腔Ⅱ(P<0.05)。上皮内的杯状细胞较多分布在鼻腔Ⅱ和Ⅲ,其数量显著多于鼻腔Ⅳ和Ⅴ,鼻腔Ⅰ黏膜上皮中未发现有杯状细胞。总之,CD3+T细胞、IgA分泌细胞和M细胞在巴马香猪鼻腔中后部分布较多,在鼻腔前部分布较少;上皮内的杯状细胞主要分布在呼吸区。3、巴马香猪鼻腔树突状细胞的分布本试验旨在了解巴马香猪鼻腔DCs的分布情况。利用免疫荧光的方法,选用MHCⅡ和SWC3a树突状细胞抗体共定位显示鼻腔组织中DCs的形态和分布。我们发现MHCⅡ+ SWC3a+ DCs最多分布在鼻腔Ⅴ,其次是鼻腔Ⅲ,在鼻腔Ⅰ分布最少。MHCⅡ+ SWC3a+ DCs在鼻腔Ⅲ和Ⅴ的数量显著多于鼻腔Ⅰ和Ⅱ(P<0.05)。MHCⅡ+SWC3a+ DCs在巴马香猪鼻腔的后部应对吸入性抗原。
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