血管生成对骨的发育、改建和愈合起着重要的作用。血管内皮细胞生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF)是1989年Ferrara等在牛垂体滤泡星状细胞体外培养液中首先分离纯化出来的糖蛋白，它是内皮细胞的特异性有丝分裂原，也是一种有效的血管形成和血管通透性诱导因子。自被发现以来，VEGF的家族成员逐步增加，目前在哺乳动物中已发现有六种就是：VEGF、胎盘生长因子(PLGF)、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和VEGF-E。参与VEGF发挥生物功能的受体目前有四种：VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3和神经菌毛蛋白(neuropilin)。VEGF可能是调节其他骨生长因子重要的介质。目前，许多学者正在致力于应用重组的VEGF进行治疗性的血管生成和转基因技术在骨形成方面的应用研究。 血管内皮生长因子(VEGF)一直被认为是生理和病理的血管生成的重要调节因子，骨形成是和血管生成密切相关的，血管的侵入是骨化的先决条件。在骨的发育和骨的再生、再塑过程中，血管的生成和骨及软骨重塑是一个必须的过程，而且它们是相互影响和紧密联系的。组织学研究发现：成骨细胞和成骨样细胞总是比邻存在于新骨形成区域的血管上皮细胞附近，在骨的重塑过程中毛细血管上皮细胞提供了微脉管系统。目前己基本确认血管 第四军医大学博士学位论文的侵入是骨形成的必要条件。这些结果均提示在骨的发育和骨的再生再塑过程中有一个共同的调节因子。 目前已确认VEGF做为血管生成因子可由多种类型细胞产生，包括成纤维细胞、平滑肌细胞、肥大软骨细胞、成骨细胞等，自Ferr盯a和Henzel首次分离出血管内皮细胞生长因子以来，众多学者对其家族成员和其受体进行了广泛和深入的研究。已有大量有力的证据证明VEGF家族成员在血管上皮细胞和成骨细胞的生成和分化过程中起有至关重要的作用。再者VEGF调节的血管生成是骨形成的必要条件，因为增加VEGF的表达可以刺激骨形成。近年来，在了解血管生成和骨形成之间密切关系的细胞机制方面取得了重大进展。因此，VEGF可能是以上生物过程中必须的调节因子。 目前对VEGF和骨发生作用机制之间关系的研究多集中于骨缺损及修复方面，关于VEGF与机械力介导的正畸成骨的相关性研究尚未见报道。在最近的研究中有学者证明:在骨缺损的动物模型中外源性的VEGF可以促进血管的形成和骨化。因此，VEGF有可能在促进骨形成方面应用于临床，在这方面的进一步的研究是有广阔前景的。正畸牙齿移动过程的实质是牙及牙周组织的改建过程，其中尤以牙槽骨的改建最为重要，它是骨吸收和骨形成的动态平衡过程，这一过程机制复杂，受多种因子的调节。VEGF可能对成骨细胞等多种细胞的迁移和分化有作用，与骨改建可能有显著相关性。本研究拟从细胞水平以及分子水平探讨正畸牙齿移动过程中牙周组织的改建和修复机制，以及研究VEGF对加速组织修复和牙齿移动的影响及作用机制，为正畸移动牙齿进一步提供理论和实践依据。本研究内容如下:一正畸牙周组织改建过程中VEGF表达变化的研究 目的:观察大鼠正畸牙齿移动的牙周组织改建过程中VEGF表达 的变化，探讨vEGF与正畸牙齿移动的关系。方法:(l):建立大 第四军医大学博士学位论文鼠磨牙移动实验模型，在1、3、7、14、Zld后，处死大鼠，固定，制作第一磨牙牙周组织切片，HE染色观察牙周组织形态学变化，免疫组化进行半定量分析VEGF:6;的表达。结果:VEGF在正常大鼠牙周组织中表达很弱甚至不表达，牙齿移动1d后，牙周组织细胞VEGF表达增强，7d、14d后表达达到高峰，此时亦可看到成骨细胞胞浆呈强表达，以后VEGF表达有所下降，但仍高于对照组。(2):在大鼠上领第一磨牙根分叉处注射rRVEGF并加力，于加力后l、3、7、14、Zld测量牙齿移动距离。免疫组化进行半定量分析VEGF16;的表达。结果:VEGF注射组牙齿移动速度高于对照组。结论:vEGF参与了正畸牙周组织改建过程，在组织修复过程中可能起到很重要的作用。二.机械力加载下人牙周膜细胞和大鼠成骨细胞中VEGF的表达变化研究目的:观察机械力加载下人牙周膜细胞和大鼠成骨细胞中 VEGF的表达变化情况的研究，在细胞水平探讨VEGF与正畸牙齿移动的关系。方法:(1):培养人牙周膜细胞并做鉴定，利用细胞加力装置，持续施加牵张力，分别于1、3、5、7d取材，用免疫组化和原位杂交技术，检测细胞中VEGF的表达。结果:随着加载时间的延长，VEGF表达强度明显增强，阳性细胞数显著增加，对机械力反应明显，在5d达到高峰后又有下降趋势。(2):培养大鼠的成骨细胞并做鉴定，利用细胞加力装置，持续施加牵张力，分别于1、3、5、7d取材，用免疫组化和原位杂交技术，检测细胞中VEGF的表达。结果:随着加载时间的延长，VEGF表达强度明显增强，阳性细胞数显著增加，对机械力反应明显。结论:本实验从蛋白和基因水平证实人牙周膜细胞及大鼠成骨细胞在机械力作用下分泌的VEGF参与了牙周组织的修复和改建。三.细胞因子对机械力加载下人牙周膜细胞中VEGF表达的影响目的:观察BMP及TGF一p对人牙周膜细胞VEGF表达?