灵芝(Ganoderma lucidum)多糖的制备及其免疫活性研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhulixiao66
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论文采用响应曲面设计原理优化了超声波提取灵芝(Ganoderma lucidum)多糖的工艺,根据带电性质和分子量采用DEAE C-52和Sephadex G-100分离得到单一组分的灵芝多糖,并研究了多糖组分GLP-2的结构及其体外免疫活性。主要研究结果如下:1、采用响应曲面法对影响灵芝多糖提取得率的3个主要影响因素即超声功率、超声时间和水料比进行优化。利用Design Expert软件分析表明:灵芝多糖提取最佳工艺为超声功率680W,超声时间17min,水料比28:1时,得率20.79±0.11mg/g,实测结果与响应面拟和所得方程的预测值符合良好。超声波提取灵芝多糖与传统的热水提取法相比,时间缩短了96%,得率提高了28%。2、通过DEAE C-52以及Sephadex G-100柱层析分级纯化灵芝多糖,得到了两个多糖组分GLP-1和GLP-2,分别占粗多糖的30.76%和48.29%,多糖总回收率为79.05%。结合紫外光谱分析和高效凝胶过滤色谱法检测了多糖组分纯度,结果显示GLP-2为均一组分,分子量为1.09×106Da。3、红外光谱分析表明灵芝多糖GLP-2具有多糖类物质的特征吸收峰,为吡喃糖且以β-构型为主,并含有糖醛酸和硫酸酯。高效液相色谱法测定分析表明GLP-2主要是由葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比分别达到68%和15%。通过核磁共振分析,得到灵芝多糖GLP-2主要是1,6连接的吡喃型葡萄糖为主链的非淀粉β葡聚糖。4、巨噬细胞增殖及吞噬中性红实验结果表明,得到灵芝多糖GLP-2能够诱导巨噬细胞,使巨噬细胞增殖率得到明显的提高,当GLP-2浓度为25μg/mL时,巨噬细胞增殖率达到161.53%,吞噬率达到了49.33%。5、通过人乳腺癌细胞培养证明灵芝多糖无直接杀死人乳腺癌细胞的作用;通过灵芝多糖诱导的巨噬细胞培养上清液对人乳腺癌增殖实验,得到灵芝多糖GLP-2诱导巨噬细胞培养上清液对人乳腺癌细胞增殖有显著的抑制作用,当浓度为25μg/mL时,抑制率达到最大,为42.03%。
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