目的:核磷蛋白1（Nucleophosmin1,NPM1）是细胞内含量丰富且保守的多功能蛋白。除在核仁参与核糖体生成以外,NPM1也可动态分布于核质与胞质,参与细胞应激反应和维持细胞稳态等重要生物学进程。早期对基因敲除小鼠模型的研究表明:NPM1是胚胎发育的必需基因。NPM1敲除的小鼠成纤维细胞（Mouse Embryo Fibroblasts,MEF）呈现多极化、非整倍性等基因组不稳定特征。缺失NPM1后的累积效应最终导致胚胎致死,至今机制不详。在人类宫颈癌细胞系HELA中应用RNAi技术敲低NPM1后,也观察到染色体排列紊乱、多核和微核细胞频发等基因组不稳定现象。然而,脱靶和敲减效率较低等RNAi技术的先天缺陷限制了对表型的观察和机制的解析。为了克服上述研究存在的问题,进一步阐明NPM1维系基因组稳定性的分子机制,本课题在人类Jurkat E6-1细胞中首次创建了针对内源NPM1基因的生长素诱导型蛋白降解（auxin-inducible degron,AID）系统,实现了对内源NPM1蛋白的快速和可逆的降解。我们期待这个新型的功能丧失性实验体系能够揭示NPM1缺失后最直接的初期生物学效应,能够成为日后研究多功能蛋白NPM1的有力工具。研究方法:1.生长素诱导型NPM1降解系统的建立本研究结合CRISPR/Cas9基因编辑技术与同源重组介导的基因敲入技术在人T细胞淋巴瘤Jurkat E6-1细胞中构建针对内源NPM1蛋白的生长素诱导型降解系统。通过基因组PCR与免疫印迹筛选出纯合敲入型细胞系,并通过免疫印迹与荧光显微镜技术评估NPM1的降解效率与可逆性回复表达情况,最终得到理想的细胞系作为本研究的细胞模型。2.NPM1降解后细胞早期的表型分析本研究首先观察了快速降解NPM1对细胞增殖和细胞周期的影响。其次对细胞形态与亚细胞结构进行了详细观察,也检测了NPM1互作蛋白的表达水平与细胞内定位。3.蛋白组学分析应用质谱-定量蛋白组学方法寻找NPM1快速降解后的差异表达蛋白。结合观察到的早期表型改变,对差异蛋白进行功能富集分析,初步预测NPM1参与其中的途径与关键因子。结果:1.成功建立靶向降解内源NPM1的Jurkat E6-1细胞系。2.NPM1降解后发生G1-S期阻滞,细胞增殖受到抑制。3.NPM1降解后异形核细胞的比例显著增加。4.NPM1降解后核仁蛋白NCL由核仁移位至核质。5.NPM1降解后可见核仁形态异常。6.NPM1降解后发现有161个蛋白有差异表达。结论:1.NPM1对维持细胞周期进展和细胞增殖有重要作用。2.NPM1对维持细胞核与核仁的正常形态具有重要作用。3.NPM1缺失引起细胞内广泛的蛋白组学改变。